多段连的克隆

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做的太复杂了。% F  J; T- R1 C: S2 ]
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可以两次PCR搞定的! ?. D7 }, Q0 @; P. g+ m2 ?
设计引物时，要在A\B，B\C和C\D之间有重合，然后分别PCR，回收各自片段。8 y9 o) T/ E4 b, i5 _
然后模板用A\B\C\D等量，引物为A 5末端和D 3末端，直接PCR。
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  i# t: ~; k" C  y7 R- R如果A\B\C\D为不同基因的片段，可考虑一步PCR搞定。用所有重合的引物，及模板PCR。