蛋白酶切求助

zhenhua

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3 N9 b! o1 ]; N" P! J大家看看我的蛋白酶切图
) z2 w9 N6 m, r) c- A我用trysin酶切后，SDS-PAGE，中间是酶切前，右边是酶切后。酶切后发现，最下面10kD条带附近还有蛋白存在，正常吗？
6 _$ h2 F0 q8 O$ [2 E2 E是不是有些蛋白没有切完全？还有所有蛋白都切成10kD左右了？
: p/ h, h/ z4 i. x2 P- w# t7 R; u$ v还有一个奇怪的是，酶切前的样品从下面开始数，第二条带一下就没有蛋白条带了,为什么呢？这个样品是全细胞裂解物，在变性裂解液中（50mM Tris,50mM NaCl,8 M urea）裂解。
- [: J  `+ V1 U谢谢！
) g( x: d2 U- j4 c" T! N4 p" m  j+ a

2012-4-19 22:32 上传

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lxm5668

蛋白酶切前要经过纯化，看你的图没有纯化。
# v6 B$ e) t/ n; Y$ d+ v我做的酶切先在细胞中过表达，然后用带标签的琼脂糖珠子进行IP纯化，再进行western-blot,转膜，将膜上的条带切下，进行蛋白酶（测序级）切，再蛋白电泳，考染检测。

yyshpy

酶切前的带也太杂了，切的目的条带是什么呢？