NK细胞越来越少

kedele

& K2 H- ]5 U" Q6 E4 I
$ z3 D5 M/ Z  ]/ S; s大家好！我做的是NK细胞。用NK细胞分离液试剂盒从脐血中分离出来。然后做流式检测CD3-CD56+的含量。分离的最好的只有30%左右。用脐血直接检测出来的CD3-CD56+是10%左右。然后用的培养基是VIVO-15+IL2(100万单位/L)+IL12(5μg/L)+双抗（1%，2万单位），接种密度是1×10^6/ml。用T25瓶培养。第二天吸出悬浮细胞，弃贴壁细胞。细胞密度无明显下降。培养5天后，细胞数量明显下降，流式检测CD3-CD56+含量也降低。希望大家能帮忙提出一些建议和意见。谢谢大家！以下是我的实验数据和相关图片：

gengtongyu521

建议（1）分离细胞时，收集自体血浆，56度灭活，作为血清使用。5 B4 e. h) }9 p* f
    （2）培养前期可以用微量的CD3单抗来刺激，这样扩增效果可能会更好。/ E' L2 I( |1 f

细胞海洋

回复 小梓莜 的帖子
1 S3 h; U9 U7 V& U  f9 U0 {0 Q! Z( c8 ?+ R
发帖 或者回复 高级模式 附件上传 单个图片不要大于1000kb

小梓莜

回复 kedele 的帖子
- K- a. T+ w/ y' T1 v0 j4 g2 V! d
' s# o: G  L0 H你好！我有个弱弱的问题，如何上传图片？麻烦你了

chenlin080102

配方有问题，缺乏足够的刺激剂

chenlin080102

这种方法养的贴壁的那部分其实是很纯的NK细胞，我做过这个流式检测，不过我还没找到办法怎样让那部分NK细胞不贴壁

大海之家

回复 jack063@163.com 的帖子9 Q8 `! }6 Q0 h# @. P/ X

' k* B" W8 M8 [5 Y6 s0 m请问你们培养的数量和表型能够达到多少？培养基是专用的NK培养基吗？

星夜倩儿

回复 jack063@163.com 的帖子
/ b$ E5 b: A2 F/ ^8 i; ^8 z3 P* G" N' N
你好，想问一下，你的NK细胞是用什么方法分离的？我用的Percoll，分离的效果不太好，希望指点一下，谢谢了！

LL87

弱阳性

kedele

回复 jack063@163.com 的帖子
9 f6 b- j! z: ]+ t
! |* v. _7 o  o* [+ F$ n好的，谢谢了！