NK细胞越来越少

kedele

4 N; A9 N2 ^; u3 R0 c. o9 q! i3 R; j$ o7 \7 m2 t4 U
大家好！我做的是NK细胞。用NK细胞分离液试剂盒从脐血中分离出来。然后做流式检测CD3-CD56+的含量。分离的最好的只有30%左右。用脐血直接检测出来的CD3-CD56+是10%左右。然后用的培养基是VIVO-15+IL2(100万单位/L)+IL12(5μg/L)+双抗（1%，2万单位），接种密度是1×10^6/ml。用T25瓶培养。第二天吸出悬浮细胞，弃贴壁细胞。细胞密度无明显下降。培养5天后，细胞数量明显下降，流式检测CD3-CD56+含量也降低。希望大家能帮忙提出一些建议和意见。谢谢大家！以下是我的实验数据和相关图片：

笨笨的图图

看你的图，发现以下几点：背景很高，死细胞很多。建议使用三标抗体：CD3/CD16+56/CD45，用CD45圈门,结果会更好看滴~~

kedele

回复 笨笨的图图 的帖子
& a. n4 o9 W1 W  Q* O5 @' B! I3 b; E7 `6 C" P+ u8 u- D
谢谢了！我们的流式都是有专人做的，我参与不进去。请问背景很高是什么意思？我想要解决的是死细胞太多的问题。谢谢！

笨笨的图图

死细胞多是你培养的问题，现有条件的改进上就是加一个CD45,据我所知，NK的培养很难，尤其是培养基的选择，你再看看吧~

kedele

回复 笨笨的图图 的帖子" M' U( ~& T* i

* V' k( `& x# ?& S好，谢谢了！
7 \. K4 e0 ?, I* A( X$ K

zuming

无血清培养确实不好养，如果没有特别的要求，还是用加血清的培养体系吧，会容易一些。

kedele

回复 zuming 的帖子
3 V) Q3 E; v- q' z% D
6 p/ N' \7 t4 E; `  M9 X+ O我们本来做了三个对照，其中加10%的1640培养基效果没有这个好，所以就用这个了

jack063@163.com

回复 kedele 的帖子
$ n7 L4 ]' ]7 V6 q- S5 T0 w5 s, f
8 ?' Y" r) M0 ~$ X( o9 R1 J你好，我目前也是培养NK细胞的，仔细看你的图片后有几点小的建议，大家互相学习：
' ~6 ]# K' M  I! O1.“第二天吸出悬浮细胞，弃贴壁细胞。”楼主是都考虑下这个天数上的操作是否太绝对了，我们目前要看细胞的数量、形态、培养基颜色判定是否进行这部操作，细胞就像一个个的“宠物”不是生产流水线步步严格SOP操作。
5 T' M9 _1 S" u/ h( h  K+ Q2.不加血清的培养基，生长的时间长是很难的，楼主可以考虑适当补加血清试试，我们加了血清的可以培养到10-14天。

kedele

回复 jack063@163.com 的帖子5 f; V/ S- L; s7 `
3 ^: n4 N' P/ p5 }4 g
好的，谢谢了！

LL87

弱阳性