大鼠骨髓间充质干细胞培养，生长因子

cavalior

养大鼠骨髓间充质干细胞2、3个月，一直养不好，P2开始老化。看到有些文献说要加bFGF、EGF，不知道各位有没有经验可以分享下啊，谢谢啊！！！
/ J( I" o+ h# d! c4 O2 E3 k& A我现在是用的Gbico 的FBS 10%，DMEM/F12 ，另外还加了丙酮酸钠、2-巯基乙醇，但还是养不好。哎，急死了哎，这实验一直没法往下做。

cocoslee

感觉像污染了，你涂个片子看看吧。

lvmaoshiwo

回复 luoziwei 的帖子7 N& q0 |2 t( j8 q0 T' r
% c- ?+ a. b/ s$ g3 M; {
细胞好纯的样子 都没有淋巴细胞。。。

ditiger

回复 cavalior 的帖子/ a3 y- g/ z/ g  J$ o5 e0 _7 `

9 G0 W) q; ], Z, c/ a4 @0 l9 m+ G感觉不是污染，小颗粒是残留血细胞吧，看最后一张图的确是老化了，在P2代老化有些不正常，估计是胰酶消化过了？

cavalior

回复 luoziwei 的帖子2 R; Y. F/ `( y) G
6 Y: c# Q& f' n- T8 {1 w
好的，谢谢啊

luoziwei

回复 cavalior 的帖子& e* ^/ u; H5 [8 F' _
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买的也行，也不贵，Gibco的好像500ml的medium要70块左右。

luoziwei

回复 cavalior 的帖子& U* o: G) X  w8 p7 e
7 L( p, I# P2 l% \: T/ A  W& ^
自己配的，没加生长因子，就是按要求加0.02M（貌似是这个浓度，0.33g加到1000ml的培养液）的谷氨酰胺。建议你第3代的细胞就可以用来做实验，rat的MSC超过5代就不行了
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cavalior

回复 cochongg 的帖子
7 a4 G, H8 p$ U# J  D* F4 ~3 K/ D, I& o' T: r% V% O
恩，是的，杂细胞比较的多。这细胞真难伺候。

cavalior

回复 frankieisme 的帖子* M) u: W9 `/ f# k

. e3 q1 n8 R9 b0 Z哦，我用的0.25%的胰酶消化的，下次换0.05%的胰酶。谢谢啊

cavalior

回复 luoziwei 的帖子0 q' V4 |( L  s. l2 Q& `
3 [0 T+ G+ [% h3 k' Q3 p0 g
太牛了，这细胞真漂亮。我啥时候也能养出这样的细胞来啊。你的培养基是买的啊，还是自己配的啊？有没有加细胞因子啊之类的？