大鼠骨髓间充质干细胞培养，生长因子

cavalior

养大鼠骨髓间充质干细胞2、3个月，一直养不好，P2开始老化。看到有些文献说要加bFGF、EGF，不知道各位有没有经验可以分享下啊，谢谢啊！！！; d& K8 g& [3 }8 F/ v: j0 [" R
我现在是用的Gbico 的FBS 10%，DMEM/F12 ，另外还加了丙酮酸钠、2-巯基乙醇，但还是养不好。哎，急死了哎，这实验一直没法往下做。

luoziwei

应该是没提好吧。

liuyul03

个人认为，干细胞的原代培养很关键，如果原代培养做不好，细胞传不了几代就不行了。

cavalior

回复 luoziwei 的帖子% T3 w, h5 E0 W2 P1 ?; o6 V0 l

$ S) C4 h$ ]7 S: a/ j您提的PO的时候细胞是什么样子的啊？能否上图给我借鉴下啊，这是我的P0第五天，细胞看起来和p0第二天的时候已经不一样了

cavalior

& U/ F2 r- _1 A
P0,第五天9 e8 G0 J2 V5 J

  `" T4 e) Y( ~! J) ~2 w/ QP0,第五天
* s7 K/ Z5 W; j# _% q
/ |) E+ p: L! s0 P. b! k3 }0 u, E% M. Pp2,第一天
3 _* H/ G* B! K' D; O[img]http://www.stemcell8.cn/data/attachment/album/201204/28/142554y300yi47wstxjwnr.jpeg[/img]

doctorqingbin

感觉是污染了，一定要彻底清理clean bench.

cavalior

回复 doctorqingbin 的帖子- O- \; i% `. `# N4 ~3 i) v! y

) |; r5 z, a: c9 t& Q不会吧，看细胞长的速度还可以啊，就是这个形态。都不知道有没有必要做流式来鉴定下。高手来帮忙啊。

luoziwei

回复 cavalior 的帖子- n1 i! j$ _, d6 v/ r

* ^$ p6 m0 I; {' [# i4 S% J这是我P0第7天的。

2012-4-28 22:22 上传

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frankieisme

不像是污染了！ P0的细胞形态非常好，传代之后不好的原因我推测一下，可能是消化的问题！你胰酶的浓度和消化的时间？一般来讲用０．０５％的胰酶消化，时间大概５分钟作用。细胞一般不超过１０代，最好在第４、５代用于实验。

cochongg

感觉背景好不干净，细胞状态也不怎样，，原代千万要状态好* E/ d, @# X2 f2 W5 j) R2 _