今天丝裂霉素处理MEF出现了问题，谁能告诉我啊

chenchunlei

    丝裂霉素处理MEF2.5小时候，用PBS洗了5遍后加了1.5ml胰酶消化液，但消化下来的细胞成胶冻样，怎么回事？之前没有过啊
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懵懂干细胞

是不是消化过头了？细胞质黏稠物质流出来了吧

细胞海洋

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# J/ W  |4 n$ A! a2 K1 a) }" U建议上图

chenchunlei

回复 细胞海洋 的帖子7 e4 L6 W: ~/ c% d' [# d- E
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我一看不行，就给扔了，接着又处理一板，今晚又得奋战12点啊，苦逼！过会看看行不行，不行必须上图求高人

cochongg

这粘稠与MMc没有太大关系，应该是因为过多细胞死亡，胞浆，最要是细胞核，还有一些酶的作用（DNA酶、RNA酶）使其粘度加大。1 T; w* B/ O& R% U2 g6 x
建议：镜检
( L  C& N2 o; Z4 r" n9 W$ N" h3 [( {' Z具体需要镜检观察才好判断，! [# V+ w! Q. W2 ]  @0 V4 F4 ^+ h( p0 G
如果离心后不粘稠，传到瓶子后粘稠的话，那好办，建议你离心后，重悬，置于4-8℃冰箱5-15min

zhusealin

可能是胰酶消化过度了吧，消化下来的细胞镜检一下，看看是不是都成细胞碎片了

yuanyan2010

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1 B. b' c4 l. W6 D洗5遍这么多啊。我们都只洗2-3遍的。。。没必要洗这么多吧。。。

momocy

我们是洗3遍的，估计是你洗的久了，消化久了，因为粘稠可能是细胞破了，里面的genomic DNA出来了，所以粘稠。话说，我有个疑问，丝裂霉素处理后一定要洗3遍吗？如果只洗一遍行不行，有人试过么？

抹了个茶

回复 yuanyan2010 的帖子+ b' H/ Z9 s, @# l1 W
; M$ V3 m7 {8 @3 Q
我都不洗的 没那么多pbs  而且我们都不用一次性的移液管 否则太浪费了

抹了个茶

开个玩笑。。 * h) ^% S: J6 C4 y/ D+ I