今天丝裂霉素处理MEF出现了问题，谁能告诉我啊

receiver1

MMC处理的时间是合适的，PBS洗几遍都没多大问题。问题肯定出在你的胰酶消化这一步上！

huangcong1988

我试过用洗两次，就洗两次，效果也行，不过洗5次可能还是多了点

huangcong1988

回复 chenchunlei 的帖子& a  ^4 P/ Z+ s8 D/ {0 h

" `/ P+ _' \  ~1 V/ b1.5ml. N- m( R. f* X( n
胰酶？1.5ml是不是多了点？个人觉得你量的三分之一就够了，胰酶哪有用那么多的啊？

zhusealin

我们也是处理完洗5遍，细胞也挺正常的。主要应该还是消化的问题

frankieisme

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) j( k2 k8 Y8 }% b; xPBS洗3次,加胰酶消化,镜下观察大细胞间隙出现,细胞稍稍变圆就终止消化,计数种板.为什么不按标准的protocol做,一般情况下还是不需要随意更改protocol.

抹了个茶

开个玩笑。。 . [9 C8 v2 f7 {. l/ O5 m* |

抹了个茶

回复 yuanyan2010 的帖子
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我都不洗的 没那么多pbs  而且我们都不用一次性的移液管 否则太浪费了

momocy

我们是洗3遍的，估计是你洗的久了，消化久了，因为粘稠可能是细胞破了，里面的genomic DNA出来了，所以粘稠。话说，我有个疑问，丝裂霉素处理后一定要洗3遍吗？如果只洗一遍行不行，有人试过么？

yuanyan2010

回复 chenchunlei 的帖子
  d' G+ P; p- V5 P7 Q9 W- I5 J2 n1 T6 z7 D7 E5 @- |
洗5遍这么多啊。我们都只洗2-3遍的。。。没必要洗这么多吧。。。

zhusealin

可能是胰酶消化过度了吧，消化下来的细胞镜检一下，看看是不是都成细胞碎片了