今天丝裂霉素处理MEF出现了问题，谁能告诉我啊

chenchunlei

    丝裂霉素处理MEF2.5小时候，用PBS洗了5遍后加了1.5ml胰酶消化液，但消化下来的细胞成胶冻样，怎么回事？之前没有过啊
5 V2 S) @% {- @% o" A$ j5 M

懵懂干细胞

是不是消化过头了？细胞质黏稠物质流出来了吧

细胞海洋

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8 Y7 R6 T! q! z: \* q建议上图

chenchunlei

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2 E! K8 @* k) p# C& ^. q, X- k4 j) {我一看不行，就给扔了，接着又处理一板，今晚又得奋战12点啊，苦逼！过会看看行不行，不行必须上图求高人

cochongg

这粘稠与MMc没有太大关系，应该是因为过多细胞死亡，胞浆，最要是细胞核，还有一些酶的作用（DNA酶、RNA酶）使其粘度加大。7 K/ _7 I8 F2 ?1 r+ F. L) o8 U
建议：镜检
: p8 T8 R+ N7 u2 }8 m3 C4 W$ r! s具体需要镜检观察才好判断，( H% W* l: q* \2 v1 c% s8 |) ]
如果离心后不粘稠，传到瓶子后粘稠的话，那好办，建议你离心后，重悬，置于4-8℃冰箱5-15min

zhusealin

可能是胰酶消化过度了吧，消化下来的细胞镜检一下，看看是不是都成细胞碎片了

yuanyan2010

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$ N' ^$ z' {4 {" Y/ t
洗5遍这么多啊。我们都只洗2-3遍的。。。没必要洗这么多吧。。。

momocy

我们是洗3遍的，估计是你洗的久了，消化久了，因为粘稠可能是细胞破了，里面的genomic DNA出来了，所以粘稠。话说，我有个疑问，丝裂霉素处理后一定要洗3遍吗？如果只洗一遍行不行，有人试过么？

抹了个茶

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6 l2 ]. ^* p8 m) ~- e5 f4 H( Q: G4 K) D: K
我都不洗的 没那么多pbs  而且我们都不用一次性的移液管 否则太浪费了

抹了个茶

开个玩笑。。 - e  x6 }% z0 r) Q8 U3 P( t