|
- 积分
- 166
- 威望
- 166
- 包包
- 186
|
养成良好的无菌操作的习惯拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。
; [' ^9 z6 E' \: O$ p% H% b- l决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！& q: S! [ D4 `, M# Z$ f
我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）/ n [) L! h3 T q3 {
另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！
9 e u" G( |$ |: D还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！# h" Z: n2 K8 o& h
使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
6 `8 x4 h8 i5 N6 S8 ]; K1. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
, |8 t+ `, m& k2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。# h& H0 ?- p4 H9 Y% j6 ^$ Y
3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。
) I" ?/ H3 O- K+ o% Y( `! w" J4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。3 |% L$ u% X( c6 }% H* u8 @0 P5 } Q
2. 1.注意喷酒精装置的应用：制作很简单，用过的化妆品，理发店理发前往头发上喷 水的瓶子及其他一些有喷水功能的瓶子，经过处理装上百分之75的酒精就可以了（我不知道有没有实验专用喷洒酒精的瓶子，如果有那就更好了）。我用的是师姐留下来的一种护肤品的瓶子。常常往超净台台面，手上喷洒酒精，效果很好。% G; ~$ k$ @: a- ~0 \
) F. J8 R! u% q B$ Z+ f: o8 c2。我进入细胞培养室就戴上PE手套（一次性塑料薄膜手套），当在超净台操作时戴上一次性橡胶手套。( Y% \& d0 o6 I" Z0 {/ J
/ R" ]2 W; c3 w1 @0 Z4 N0 V5 m/ Y6 C3。培养箱内水盘里的水，用灭菌的超净水，每周更换一次（至少也要两周换一次）。换水前要用百分之75酒精消毒。水浴箱也要定期消毒（用百分之75酒精）换双蒸水。
, s m0 D& i7 ]+ S2 ?5 v9 R5 W3 ^8 I( S1 V% d& B
4。从培养箱内取东西前手一定要喷酒精，动作要快，可以先看好了，要取的东西在那里，然后快取。显微镜下观看细胞时间也不要过久，否则会对细胞有不利影响。
' ?% r/ N2 h7 ^) d, f
5 i s, r5 ?5 G+ ?3 y9 ?4 R2 w5。很多人喜欢常规用抗生素，其实除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。
, f( t$ L9 W3 F1 [( o- p
9 d$ D" t' o2 @. @+ G7 k) ]& V6。液体培养基贮存于4℃ 冰箱，实验进行前放在37℃ 水槽中温热。温热前后注意酒精消毒。$ F; F. j& O1 I) @. D4 o$ P
8 x# h2 e2 ~8 |
7。用离心法从动物身上取细胞时， 其离心速率不要超过1000转/分钟（很多文献上都大于这个数值，但记住不要超过1000），时间一般不超过10分钟，否则会造成细胞死亡。
3 e7 X7 k( V$ l# T/ r( p% j8 w& ?9 M7 T) |, ]9 o
8。取出冷冻管后， 一般是放入37 °C 水槽中快速解冻。我按着师姐的经验都是放入38°C的水中，上面一些战友提到了39和40°C，不知道效果如何，希望多多交流，希望其他战友如果也有不同于37°C的，请多多跟帖，互相交流。在水中摇动冷冻管的时候水不要浸到瓶盖。2 @4 L$ o+ O1 I
, S5 v4 p7 w, H( ]
9。在超净台内，瓶盖口应该朝下放。我们知道，用酒精灯的火烧一下，不是为了杀菌，主要是形成向上的气流，防止空气中的细菌落下，如果这样的话，那么瓶盖口向上就不对了，所以瓶盖口应该向下放，但应该注意超净台的酒精消毒。# Z9 E P0 E( D
|
-
总评分: 威望 + 2
包包 + 10
查看全部评分
|
发表于 2012-5-2 18:58
发表于 2012-5-2 19:06
这个嘛，污染不要紧，重要的是那句“留得青山在不愁没柴烧”，，，你都养到第二十了，有冻存吗？？？？# G, x/ {# l H8 v% M( g
0 d1 i4 N$ g7 [; V
! R6 q# D$ p" {5 h7 ]0 |. l