mouse ips 诱导心肌细胞的方法

redmaple

求mouse ips 诱导心肌细胞的方法！

细胞海洋

回复 2006sw0657 的帖子2 @4 g$ s9 t. ?2 G2 A7 q, s0 O

$ r& E9 T3 L- Z8 B6 u建议你发新帖提问

2006sw0657

回复 ligangtiancai 的帖子% v; ]) R  J6 z  Y

/ c; f1 l9 j0 E$ `3 q请问一下  小鼠iPS传代时  用0.25%的不含有EDTA的胰蛋白酶消化  可以不？  如果可以  请问 可以告诉我具体传代过程吗？还请指示~  谢谢

2006sw0657

回复 redmaple 的帖子3 n: V6 d* B, ^7 f
3 `- x5 o% R% R/ s0 a3 D  U& S
请问一下  小鼠iPS传代时  用0.25%的不含有EDTA的胰蛋白酶消化  可以不？  如果可以  请问 可以告诉我具体传代过程吗？还请指示~  谢谢

gexiaoyatou

回复 cochongg 的帖子) Q& d5 q( ~! a
6 p. C& Y7 u- J: p; @
你好，我想问一下你，这是悬浮培养的方法吗，我做悬滴法好几次都没养出来，而且细胞在15到20分钟后就开始基本都贴了，没法坚持差速贴壁这么长时间呀？最后细胞也不跳

ligangtiancai

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- }$ _3 N: [1 G# {+ m
1 }+ i& X. g$ Y# q/ n是这样啊 谢谢！

cochongg

回复 ligangtiancai 的帖子2 P8 l) p8 z) }" ~3 b1 s4 T/ s8 J! V

7 y$ \; J% t' a" k' T消化之后的流程一直用，普通高糖加15%的血清，也能成功诱导。
' u6 J( w5 x1 N  g6 `# h不过我还会加谷氨酰胺，非必需氨基酸（MEF的培养基可不加），2-巯基乙醇...............
3 }7 ^! r% P% b0 _/ I过滤一下就更好。
4 `1 _+ L5 X& i1 }4 P" X* k# z也有诱导失败的经历，有次换液忘了预热培养基，后面一直没长好。

ligangtiancai

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( M/ s. v% j$ l
- I. w% ]- ?' I6 a多谢你的解答，我还有个问题就是EB在做悬滴法诱导时是否需要用ES-qualfied的血清，还是用普通的FBS就行。换句话说，就是用MEF的培养及是否可以做HangingDrop？ 谢谢！

ligangtiancai

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  B. [( |" z, I( Z; J& I# i! q/ I& l8 M7 A- r0 _: Z7 M
谢谢，受教了！

cochongg

回复 ligangtiancai 的帖子
. G6 A  `: g7 v. m% k. w# E; l7 g; v$ M" z0 f  [2 {4 R# h
我觉得（仅个人而言）：别人提供的方案自己做总会出现好多问题。
( I* {+ H8 t6 W; O: g但是我们做事不仅仅是看一个步骤做一个步骤。
: a+ @. ]. ]2 ~! F: I尤其是做实验，思考是创造的源泉。
6 k, \1 n% M# G, B- {
& r: C5 |. |) V% `1做滴目的是悬浮培养，滴做小了（形状不圆，翻转时下垂不足，而且营养不够）你可以衡量一下做一些不同大小的滴，比较一下，形成EB的大小，时间都会不同。你选其优，弃其劣。
6 M# `" L. i! i# g' m* @( [( f" \( `7 N1 w
其他两个问题都属于正常现象，已经分化的细胞不能形成Eb等，，，具体我也不能做出判断，你可以和你们实验室的前辈讨教一下。
: N6 P% t* t" `2 c' a: x
8 y1 u( S+ |5 q6 S7 R& C3 z推荐一本入门教程《小鼠胚胎操作实验手册》，，，，不能说很好，书好不好还是看个人悟性。2 n$ M9 w. B  ?' N5 B
你问的问题太想我们实验室的学生了，，哈哈，，，常常埋头做事，总不停下来思考片刻，
# U* q$ [4 ~: _7 F  [  ^. W自己设计，验证。这样你的成就感会更大，以后说不定还能发现什么，创造什么，，，，