求助：miPS的RNA提取

ligangtiancai

RT，求高手指点，miPS在提取RNA时如何去除MEF？

Yedan

b. 诱导多能干细胞传代
' ]( B" h) L7 V$ w, o& }取60-mm培养皿 每个加入3 ml 0.1%明胶溶液，37℃包被30分钟以上。
8 U, J5 a6 b5 r8 S) _/ x吸掉培养基，加入PBS清洗一遍，每个60-mm培养皿中加入1 ml 0.25% Trypsin，37℃孵育2分钟。
+ v; o0 k6 f' s) M6 m5 ?加入2 ml DMEM 培养基，用1 ml 枪头轻轻吹打3次，将细胞悬液转移至15-ml 离心管，1200 rpm离心5分钟。% e& Q3 }: Y- x9 G
吸掉上清，用4 ml KOSR-DMEM培养基重悬，转移至明胶包被的60-mm培养皿，37℃，5% CO2培养，让滋养层贴壁40分钟。
0 Q3 B5 J5 x/ P% G  v- z6 O! w$ z% K将60-mm培养皿中细胞上清转移至15-ml 离心管，1200 rpm离心5分钟。
. F5 R  K$ E" z4 H8 p吸掉培养基，用4 ml KOSR-DMEM培养基重悬，按照1：4的比例分至3个铺有滋养层细胞的60-mm培养皿，37℃，5% CO2培养。
  ^2 {2 f" C- P& x将就一下吧，我本科的时候写的，基本都对

shangchunhua

楼主可以根据IPS和MEF贴壁速率的不同将它们分开

wwy551

回复 ligangtiancai 的帖子) |6 {, r( V- V% a
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本来想说可以用干性marker区分MEF和miPS，然后用FACS分选出 miPS细胞群。这也是很常规的从一群细胞中分选特定亚群的方法。楼主是不是可以考虑一下直接在显微镜下挑克隆，尽量挑取克隆最中间的部分，以防MEF污染，克隆周围的部分舍弃。再用小提RNA的Kit提取即可，这个对于细胞数目要求不高，而且相比FACS简便。