求助：Yamanaka factors

franklinhg

如题，由于现有的质粒都是别人给的，拿回来后也没有验证过。 小弟做小鼠的iPS两次了，结果都没有克隆出现。现在老板催的急，再做不出来的话，估计要直接走人了。 恳请大家帮助小弟一把，能否给予这些质粒一点？十分感谢！

meister

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& p  M$ Z  k6 s1 P2 ^
那就没办法了， 不然自己私下做做看:)

Yedan

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$ b2 w) \3 X' d) i& D. C
2 x0 w( H' d! u# u我加了，如果还有什么问题，论坛QQ联系吧，祝好！

franklinhg

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; w( _6 u: w. S2 Z: Z, X* k7 W* I$ U
QQ286287818

Yedan

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2 T! V( z' S5 A! z/ ~! M  J. t' s1 W+ R$ T1 N& e' Q
呃，给你几点建议吧：1.转染技术要过关，否则病毒滴度没保障，尤其是你说了少花钱这一点，就不可能去浓缩了，另外包完毒一定要测滴度，至少得有7次方吧；2. 感染的时候要算MOI，不要乱加病毒，不是越多越好；3.诱导过程中要有耐心和关心，多观察现象，MET/Oct4-GFP这些，自己要及时拍照记录。大概这些吧，我急着出去不好意思，实在不行，你留联系方式，我们再联系。噢，还有一定要确保你们的细胞没支原体，这一点非常重要。另外小声说一句，Yamanaka那套体系，我做的时候是6，7天出GFP阳性...，12天就开始挑了...

franklinhg

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& H# d' x3 ]4 o; |3 N5 j, ?9 E# ~
不好意思 我不在上海  现在在深圳。

franklinhg

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( Z0 K9 J+ t9 w5 _  U4 L5 T
9 `  H0 J4 L4 g9 _- f, i; |这个只要做过分子克隆等的都清楚，最主要是现在这个老板是临床的 然后分子这些根本就是七窍通了六窍-----一窍不通。 但是还要瞎指挥，乱安排。。。结果，什么课题实验在他眼里都是很easy的。而且还不希望自己重复，说是浪费钱。就差把我气的吐血了。

franklinhg

回复 yyshpy 的帖子; E) Y" t# D: W3 d9 j/ G8 g

) h3 Z% ~6 ~4 q. z现在是我和这边做过的人交流  请教了  但是老板不愿意用其他系统的  只用Yamanaka  06年的  不愿意花钱  

franklinhg

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9 A6 ~7 b# Q/ Y
/ w% U. g$ n# u是的  就是06年的Yamanaka的那一套系统

meister

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9 V4 ]+ q2 q3 J% h- w# N( H$ e( u' _5 H( r& G1 A1 _
先验证， 再求助。6 C7 T4 S" c& s: a
别人再给你的也也不一定对。
: \) K! O% p3 e验证是必须的