求助：Yamanaka factors

franklinhg

如题，由于现有的质粒都是别人给的，拿回来后也没有验证过。 小弟做小鼠的iPS两次了，结果都没有克隆出现。现在老板催的急，再做不出来的话，估计要直接走人了。 恳请大家帮助小弟一把，能否给予这些质粒一点？十分感谢！

meister

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0 @. O6 G5 n8 ?/ {1 B0 f
0 I$ }7 D" @# [! W/ g那就没办法了， 不然自己私下做做看:)

Yedan

回复 franklinhg 的帖子  T* k$ h8 i/ r4 e' ^) F
" K- L  R6 x5 p9 m! S
我加了，如果还有什么问题，论坛QQ联系吧，祝好！

franklinhg

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6 @6 X. X- g% @, ^! ^9 q
, s2 A* V% B! f  K' `QQ286287818

Yedan

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) L1 @8 E$ m$ p( O# r9 R: \5 T
/ M$ D7 Y% t6 F- U' @2 F呃，给你几点建议吧：1.转染技术要过关，否则病毒滴度没保障，尤其是你说了少花钱这一点，就不可能去浓缩了，另外包完毒一定要测滴度，至少得有7次方吧；2. 感染的时候要算MOI，不要乱加病毒，不是越多越好；3.诱导过程中要有耐心和关心，多观察现象，MET/Oct4-GFP这些，自己要及时拍照记录。大概这些吧，我急着出去不好意思，实在不行，你留联系方式，我们再联系。噢，还有一定要确保你们的细胞没支原体，这一点非常重要。另外小声说一句，Yamanaka那套体系，我做的时候是6，7天出GFP阳性...，12天就开始挑了...

franklinhg

回复 Yedan 的帖子" y0 \  ~+ P+ L/ T, B: H* q4 X4 W

6 B& r9 }- x9 W, f# y; |0 M9 ~不好意思 我不在上海  现在在深圳。

franklinhg

回复 meister 的帖子% I4 c! z) d. @- U  Y. z! u( P% S

+ E- v9 ^8 F0 m8 i这个只要做过分子克隆等的都清楚，最主要是现在这个老板是临床的 然后分子这些根本就是七窍通了六窍-----一窍不通。 但是还要瞎指挥，乱安排。。。结果，什么课题实验在他眼里都是很easy的。而且还不希望自己重复，说是浪费钱。就差把我气的吐血了。

franklinhg

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4 u5 T/ A& i* P* e( Y# K5 z
+ |9 I  w) F$ ?* Z现在是我和这边做过的人交流  请教了  但是老板不愿意用其他系统的  只用Yamanaka  06年的  不愿意花钱  

franklinhg

回复 Yedan 的帖子; p" i+ ?* K% _' I. z7 B  Y
, A) x3 g9 `7 \0 S/ S) f
是的  就是06年的Yamanaka的那一套系统

meister

回复 franklinhg 的帖子5 W6 Y) z3 ~* F7 p3 x
' `/ m. l4 b0 o2 R, \6 N# s' G
先验证， 再求助。; T0 V# }1 t& `: o) X
别人再给你的也也不一定对。
$ v: q4 I8 d" ^, L验证是必须的