【请教】外周血分单核细胞培养DCs的详细步骤

wagumaxida

大少爷 发表于 2012-5-18 22:16 * S. j1 O! g- Z; c6 u
1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10mi ...

- c: n, Y0 ?4 w" r感谢 另外收获后的维持培养也需要加细胞因子吗？ 需要加什么

大少爷

1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10min。& ^; R$ |% Y$ Y/ y" S
2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：8 M) v7 b- B- {# Y4 R
A.贴壁时不加血清，不加细胞因子。9 I. C  e& J- R" ^3 \4 a* K1 f: Y
B.贴壁时间是2.5h
; z; Q* C& E2 B  i9 k C.贴壁时是在培养瓶中或培养皿。
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. K8 [$ m, r& _3 g) L1 t4 ?3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：
  N" R/ E# P" Y& m6 u3 {1 d8 r! ]. B A.换液间隔一到两天，半量换液" W4 E. l; A) _0 |; I
B.换液时所用培养液中因子的量是1000 U /ml的GM-CSF和1000 U /ml的IL-4
  z0 Q+ R% v. U4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步：
5 i; \; p5 ~. X- c& x% f A.在第五天开始诱导
3 J8 I& i/ R; Q) w B.用TNF-α进行诱导，量是50ng/ml。( G; ]' ~$ g$ m1 K  @& ^  F
  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4。
% P8 Q4 ], p$ Z! M7 C6 d  D.诱导一到两天，显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养，可以收获。

大少爷

1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10min。( y  Z. P3 I5 M6 N
2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：
4 X) B$ K% ^8 n- N$ M( S A.贴壁时不加血清，不加细胞因子。
1 o. Q  u! W0 T4 V B.贴壁时间是2.5h7 X1 G( N) {: B
C.贴壁时是在培养瓶中或培养皿。
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/ ^1 w  v* h2 j" f1 r3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：
( b  s! n4 G0 S; s A.换液间隔一到两天，半量换液
# ]2 N! O# i! H* p5 d* _B.换液时所用培养液中因子的量是1000 U /ml的GM-CSF和1000 U /ml的IL-4
; m" z* r" k* v1 c  h2 ^4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步： 8 J9 R' E8 f& x/ K0 Z
A.在第五天开始诱导
  a+ S! G8 o$ ^1 j( u. ]7 n* i B.用TNF-α进行诱导，量是50ng/ml。
( q2 O: Z) T8 s+ X% K+ M$ I4 }  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4。9 ?  u7 Y! J" A* O" R( w/ v1 z8 N
  D.诱导一到两天，显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养，可以收获。

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