【请教】外周血分单核细胞培养DCs的详细步骤

wagumaxida

3 v' m! [+ l# \( ]: c0 _0 g
; y, Y3 V6 H- H0 O' |- {
主要有几个问题亟待解决
" c! K) Z6 ?3 u$ i9 B- U1.外周血分淋巴细胞时，梯度离心去除血小板时，离心梯度是怎么设置的？5 ?% A% c" v/ t( o2 b7 |
2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：. R7 g  G# L1 D7 M; G. ]
  A.贴壁时需要加血请吗？需要加细胞因子吗，需要的话加哪些，量是多少？+ M* K' ?& ?8 _, x% |; x" U
  B.贴壁时间是多长时间，2h还是48h？; _! e4 g9 S' G" U
  C.贴壁时是在培养瓶中好还是在六孔板里好？( E6 ~3 r1 C9 r2 c2 [, U  M# D6 ^
  D.这一步还有什么要注意的吗？
2 B% O! E( K* [, q) `3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：) v# B9 ^2 N8 Y% F# e4 n3 C; M6 d4 A, |
  A.换液间隔怎样？半量换液还是什么其他方式？
; {( L; W8 `* |4 h& U/ |  V3 ?9 S  B.换液时所用培养液中因子的量是多少？3 E% L" @+ l6 g
4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步：% T. I8 e9 L" c8 G$ P8 d
  A.在第几天开始诱导？8 O* _) ]! U9 k. s- L; h
  B.用什么因子或者药物进行诱导，量是多少？- f; B- `; A: n! J! ]
  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4之类的吗？2 e" G) z0 E' Q' s
  D.诱导多长时间可以收获？
, J, M7 U" x+ X6 HP.S. 如果要用荧光腺病毒感染的话，在第几天哪个阶段感染会比较好？
. K1 g. Y0 K' D. M% p: Q
* Z: N7 ~6 d5 l. ~  X1 n1 T: c非常感谢！

细胞海洋

回复 hwlightning 的帖子+ f, _0 T, k: Q2 z7 E

7 J  d& |# g$ A* _; k6 |看14楼

大少爷

是的，50ng/mi1 E* ?7 q8 h- P

hwlightning

回复 大少爷 的帖子
0 _6 X- Z3 q  P6 e  c, l* |9 E" U( u- N
请问你用的是不是PEPROTECH品牌啊) J& w4 y- f. O* [6 ^
IL-4的浓度会不会太高了导致浪费因子。

Tevirly

回复 大少爷 的帖子' F$ W* T4 f$ ^
5 X2 I2 e' P! h+ Q
请问如果用培养皿培养单核细胞诱导DC的话，用哪个牌子的培养皿比较好呢

deshenglll

学习，受益。

大少爷

活性单位U与质量单位ng好像没有换算关系，每种抗生素好像都不一样。。。

hwlightning

回复 大少爷 的帖子
. v# `( P# Y& W1 B' s
: C, ^3 f' ]1 [+ D* i+ f7 y8 j( J7 W% f/ s活性单位U与质量单位ng怎么换算啊？

vanessa

大少爷 发表于 2012-5-18 22:16
# ~9 J, X. }  p% G; ~5 y- \: S" N- ~1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10mi ...

" Z1 D3 g; ^& E' k; u, M+ [- X
第一步我们一般是根据淋巴细胞分离液说明书来进行操作的，一般国产和进口的Ficoll离心力会有所不一样。

hwlightning

回复 大少爷 的帖子
7 V+ d0 o3 ^3 C. `- e7 H; m( s, ?8 C; ]; e1 p# r# n
请问下GM-CSF,IL-4和TNF-α国产的就行还是要进口的？能推荐下厂家吗？