PCR中，延长退火时间和增加退火的循环次数有什么区别吗？

ying

退火时间延长是没有意义的。一般而言30s的时间充分且必要。循环数在特定前提之下确实可以提高产量，但看你说的这种情况，不像是能提高循环数就能做出来的。
" g& S# {( u5 W: t几个关键信息，如果你不告诉大家，大家无法帮你分析：
  R% t: j1 t  v$ p5 k% P2 w6 n1，模板是cDNA吗？还是基因组？还是细胞或组织？7 E( c- P3 w# ]* {" t
2，模板的GC含量如何？
( |/ L- w: A9 H" G3 s5 k3，你用的是什么公司的什么酶？至少要告诉我是普通的Taq还是KOD之类的高保真酶？
* Z  m2 R( v9 V4，你现在的反应条件。你现在PCR圈是数是多少？延伸反应时间是多少？
2 p5 K  L% W8 A5，你最好把你的2000多bp的序列贴出来，（不仅要包括目的序列本身，还要告诉我们目的序列之前和之后各100以上bp的序列），再把你的引物序列贴出来，大家可以帮你看看引物是不是有问题。你设计引物时设计的Tm值是多少度？' v5 D2 `( ~- m$ |7 H
6，你所谓P不出来，是完全没有任何条带吗？还是没有P出来目的条带，但是有其它大小的条带？还是是一个拖带的形状？你最好把胶图贴出来，便于大家分析。你确定不是PCR体系本身的原因吗？有带一个阳性对照吗（就是你实验室其他的人曾经P出来的序列，你使用他们的引物和模板，确实能够P出来他们所P出来的序列，但是同时做的实验里面你自己的PCR没有P出来）？