PCR中，延长退火时间和增加退火的循环次数有什么区别吗？

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退火时间延长是没有意义的。一般而言30s的时间充分且必要。循环数在特定前提之下确实可以提高产量，但看你说的这种情况，不像是能提高循环数就能做出来的。
0 l% f0 q( H9 R1 D  J几个关键信息，如果你不告诉大家，大家无法帮你分析：
" A4 Q: s- P7 ]% s" J# Y1，模板是cDNA吗？还是基因组？还是细胞或组织？
9 U* c$ A! p8 w( Y2，模板的GC含量如何？
) U8 Y$ }: y% o& ~2 p/ k+ g3，你用的是什么公司的什么酶？至少要告诉我是普通的Taq还是KOD之类的高保真酶？
, l; X. P  ?' [" ^0 q4 D0 `4，你现在的反应条件。你现在PCR圈是数是多少？延伸反应时间是多少？/ H" b1 s5 L3 O! t' S% v* \8 t
5，你最好把你的2000多bp的序列贴出来，（不仅要包括目的序列本身，还要告诉我们目的序列之前和之后各100以上bp的序列），再把你的引物序列贴出来，大家可以帮你看看引物是不是有问题。你设计引物时设计的Tm值是多少度？
7 ]1 x# U3 c9 Y6，你所谓P不出来，是完全没有任何条带吗？还是没有P出来目的条带，但是有其它大小的条带？还是是一个拖带的形状？你最好把胶图贴出来，便于大家分析。你确定不是PCR体系本身的原因吗？有带一个阳性对照吗（就是你实验室其他的人曾经P出来的序列，你使用他们的引物和模板，确实能够P出来他们所P出来的序列，但是同时做的实验里面你自己的PCR没有P出来）？