谁能赐教一下细胞铺板的窍门

上官冰梦

请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

wagumaxida

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:31
1 V& B2 ]2 `% U3 O  S% D请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

, \4 o2 R0 V# f9 f; h5 F4 i4 ?先混匀再铺板 铺完不用吹打 以免吹打不匀 轻拿轻放 避免剧烈晃动导致外溢或者细胞集中于中间

上官冰梦

回复 wagumaxida 的帖子5 v4 R0 Q; g$ ^9 O; S% M

3 r! p, H8 @: f5 z# ]! o0 y那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃了！望赐教
0 N7 ~3 w( A  h" d1 u. d$ I5 [+ b# j

wagumaxida

% f3 z+ \9 y4 {9 A! y( e

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:44
2 Q: H' O5 N. E/ j; }: Q, @7 x回复 wagumaxida 的帖子
2 l+ g) h7 H4 d: H* U
9 L3 Y7 p6 x' q! R& y那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃 ...

; X# P+ b& k+ J0 }* i) z/ ~* a- K- m

4 Y, W; T* m1 u一般来讲 24孔板我们加1-1.5ml，它的底面积一般是2平方厘米，细胞数目一般加1-3×10^5个，祝你成功

cochongg

其实大家都有这样的经历，细胞在中心受到的冲击力最小，沉降过程中，中心沉淀最稳定，$ [) i' c% w4 \% T2 R+ ?
，四周的细胞由于培养基液体在培养板（圆形）边缘效应影响，形状就像漩涡，中间凹陷，边缘液体高于中心。
( F. J' @5 ?' v/ w7 o5 G9 i: u% C1 J细胞都往中间聚拢。
$ {* c0 b/ q4 l4 ?7 L! c3 c( M% @2 u' J# J" Y  l
所以吹散的细胞悬液，加到板上，前后摇晃数下就放培养箱，就是我我们一般的做法，
8 K* u0 h; E! t$ L) o其实也没有什么办法。
; B8 a: X- C4 S9 y, C  @! k, Z4 d9 d我们能做的就是：尽量均匀，定时换液，保证培养基营养充足。2 i# r& W  C7 Z/ i5 a& V. M( @' L4 S
适时传代，别样细胞长过。
. _  a( a) O( X" V9 v8 d/ Y$ {只要细胞状态好就ok了6 ?# B3 y2 }$ x/ o
; N% [7 M- a  q6 S7 B4 B
消除边缘效应，可以液面加油，但是这样养细胞是行不通的

上官冰梦

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) a$ L# v/ U3 O) D; }6 J
* p* @" K7 f" A. o0 g  I* U/ D& w谢谢您 您也好运

上官冰梦

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7 v# Y" K( c2 m; F  o8 ?7 S# h) q; X+ l+ }0 {+ D7 H8 f
多谢

linzi214

制备成细胞悬液加到培养皿中，现在外面放置几分钟等细胞差不多贴壁时再放进培养箱，这样细胞贴壁比较均匀，不会导致中部细胞密度过高

myboluo

关键是用十字交叉晃动保证平均（此法对6孔板效果最好，24孔边缘效应太严重，需要晃动次数比较多）! b$ Q3 C  A, _5 J
细胞悬液混匀是必须的，24孔板用1ml培养基，一个孔长满贴壁的肿瘤细胞数约为2.5x10^5左右。( G; I9 M( k% `1 v7 Y
十字交叉晃动就是，加入细胞悬液后，前后晃动20~30次，停30s，再左右晃动20~30次，平放3~5min，轻轻移入培养箱。晃动幅度尽量大，只要液体洒不出来……

溜圆

我都是先在24孔板内加入0.5ml左右的培养基，然后再悬空加入细胞悬液，这样减轻液体表面张力的作用，我觉得铺的还可以，必要的时候可以再吹打几下。加完后在台子上放一会再放进培养箱里去。