谁能赐教一下细胞铺板的窍门

上官冰梦

请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

溜圆

我都是先在24孔板内加入0.5ml左右的培养基，然后再悬空加入细胞悬液，这样减轻液体表面张力的作用，我觉得铺的还可以，必要的时候可以再吹打几下。加完后在台子上放一会再放进培养箱里去。

myboluo

关键是用十字交叉晃动保证平均（此法对6孔板效果最好，24孔边缘效应太严重，需要晃动次数比较多）3 u+ B" m9 q$ k) P; W6 j( ^
细胞悬液混匀是必须的，24孔板用1ml培养基，一个孔长满贴壁的肿瘤细胞数约为2.5x10^5左右。0 F" o7 {6 ?9 w5 P
十字交叉晃动就是，加入细胞悬液后，前后晃动20~30次，停30s，再左右晃动20~30次，平放3~5min，轻轻移入培养箱。晃动幅度尽量大，只要液体洒不出来……

linzi214

制备成细胞悬液加到培养皿中，现在外面放置几分钟等细胞差不多贴壁时再放进培养箱，这样细胞贴壁比较均匀，不会导致中部细胞密度过高

上官冰梦

回复 cochongg 的帖子* O: n' E$ J1 Q5 O

, c- [9 X8 A3 f多谢

上官冰梦

回复 wagumaxida 的帖子
  H* |, ]* p: }' [& m. O' [
: J/ \( q" ]. v  r! B; I: H1 ^谢谢您 您也好运

cochongg

其实大家都有这样的经历，细胞在中心受到的冲击力最小，沉降过程中，中心沉淀最稳定，: L. h, [6 F% w0 i. Z2 m  ~6 G% A% {# S
，四周的细胞由于培养基液体在培养板（圆形）边缘效应影响，形状就像漩涡，中间凹陷，边缘液体高于中心。2 E4 _# V9 J- G/ ?" x: Y
细胞都往中间聚拢。% s8 f' W5 t) w0 C. o; N

! R" W% x; a( T" b) D  n  O所以吹散的细胞悬液，加到板上，前后摇晃数下就放培养箱，就是我我们一般的做法，9 e/ a8 E9 b& ], Y
其实也没有什么办法。
( x+ _2 J9 Y' k3 U* h我们能做的就是：尽量均匀，定时换液，保证培养基营养充足。+ l; y8 v0 X+ ?) a( e9 w% E* Q
适时传代，别样细胞长过。
0 Y" {& }4 \  k/ V5 h只要细胞状态好就ok了6 N+ i$ }; e6 N& y* n
* n& @6 M! E6 Q  N/ h
消除边缘效应，可以液面加油，但是这样养细胞是行不通的

wagumaxida

, L5 f2 [, E7 x) U4 L

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:44 0 O) C% k8 _4 d* ]& G0 k* t8 [
回复 wagumaxida 的帖子
, A; o' O2 E+ L' x' q8 E0 U5 W) S1 j# U1 i
那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃 ...

( u0 T5 p: l+ j* g' _1 w3 D1 g, i/ P% ?5 C
一般来讲 24孔板我们加1-1.5ml，它的底面积一般是2平方厘米，细胞数目一般加1-3×10^5个，祝你成功

上官冰梦

回复 wagumaxida 的帖子' A# \  K9 s2 m1 l) V
9 F3 P! u2 v2 _  d+ g
那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃了！望赐教, }1 i! K# r  n0 |" r# B/ q; j

wagumaxida

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:31
; q) Y' ^* R( A5 a# B请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

/ H9 I3 z: l8 P0 @+ u3 f
先混匀再铺板 铺完不用吹打 以免吹打不匀 轻拿轻放 避免剧烈晃动导致外溢或者细胞集中于中间