谁能赐教一下细胞铺板的窍门

上官冰梦

请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

wagumaxida

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:31 * v/ z/ o# g; q: H/ I5 L
请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

5 b8 \8 o7 X' X' M; l先混匀再铺板 铺完不用吹打 以免吹打不匀 轻拿轻放 避免剧烈晃动导致外溢或者细胞集中于中间

上官冰梦

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3 f5 }2 H% o/ K. R
6 I1 V. J7 J8 L' d5 n' Y那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃了！望赐教
5 L; a" H% ]. V5 J

wagumaxida

6 ]7 K/ w, f- I

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:44 ( _+ m; i% P$ b6 e
回复 wagumaxida 的帖子/ `9 h1 n7 v0 _' x

  D# s0 N  m" T那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃 ...

# U* H: D6 x. ^& k" N7 L

3 t! r  K: G* J5 m9 P一般来讲 24孔板我们加1-1.5ml，它的底面积一般是2平方厘米，细胞数目一般加1-3×10^5个，祝你成功

cochongg

其实大家都有这样的经历，细胞在中心受到的冲击力最小，沉降过程中，中心沉淀最稳定，
/ F6 l, [, T1 e，四周的细胞由于培养基液体在培养板（圆形）边缘效应影响，形状就像漩涡，中间凹陷，边缘液体高于中心。  G! \3 u% ~1 X# N4 n7 U) p( r5 s
细胞都往中间聚拢。
$ J6 _# |! U/ p6 \
: I, w0 A( z# H% P, B/ Q3 H5 h所以吹散的细胞悬液，加到板上，前后摇晃数下就放培养箱，就是我我们一般的做法，
- d% {. T: ^. v- q. _其实也没有什么办法。
- _! p- {8 x# B/ }; U我们能做的就是：尽量均匀，定时换液，保证培养基营养充足。0 n9 m9 v! I6 I( b
适时传代，别样细胞长过。' x9 [6 W, R5 j+ V. S. ]
只要细胞状态好就ok了
  c9 n# d, l" f. Q( g
  ?! A+ I/ M4 [消除边缘效应，可以液面加油，但是这样养细胞是行不通的

上官冰梦

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( |8 d$ L8 w- \" o+ Q& m; Y  I谢谢您 您也好运

上官冰梦

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$ M# F  p0 [8 v
4 h6 k7 ~  a& ~多谢

linzi214

制备成细胞悬液加到培养皿中，现在外面放置几分钟等细胞差不多贴壁时再放进培养箱，这样细胞贴壁比较均匀，不会导致中部细胞密度过高

myboluo

关键是用十字交叉晃动保证平均（此法对6孔板效果最好，24孔边缘效应太严重，需要晃动次数比较多）  q; x" b% d+ U6 g7 }
细胞悬液混匀是必须的，24孔板用1ml培养基，一个孔长满贴壁的肿瘤细胞数约为2.5x10^5左右。& `# z1 x6 _+ t, h' C# z
十字交叉晃动就是，加入细胞悬液后，前后晃动20~30次，停30s，再左右晃动20~30次，平放3~5min，轻轻移入培养箱。晃动幅度尽量大，只要液体洒不出来……

溜圆

我都是先在24孔板内加入0.5ml左右的培养基，然后再悬空加入细胞悬液，这样减轻液体表面张力的作用，我觉得铺的还可以，必要的时候可以再吹打几下。加完后在台子上放一会再放进培养箱里去。