求高手指导我的小鼠bmsc长得怎么样，谢谢

bty007

我用了两种方法取干细胞，①全骨髓法充股骨胫骨骨髓，②酶消化骨片法消化颌骨。; x* M+ A- ]: ]' K5 U7 }
目前养到原代第八天，骨片法长出一点像干细胞似的了，骨髓法还都是圆形的，这样正常吗？
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5 c& }" O6 T- W6 ]骨髓法24h半量换液，72小时全量换液，之后3天一换。刚接种时细胞很多的，感觉细胞越长越少，是污染了？细胞死完了么？
/ _3 ?8 W' b5 F" w) n: @1 `# |骨片法72h半量换液，之后3天一换（下面有梭形出现的是骨片法的，是小鼠间充质干细胞吗？长得正常吗？）
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bty007

回复 luoziwei 的帖子
7 x+ j& D. }* }4 i" R' _6 w. A8 Q" W; y! @/ p, U; f. K
是最后一张图吗？这不是干细胞老化了？
5 ?" K3 V+ @6 E! Q8 ~1 s这几张都是还没传过代的，原代十天左右吧，这么快干细胞有可能分化吗？谢谢

luoziwei

回复 bty007 的帖子/ S, N2 \" y4 t. {: y
4 c3 `) _0 e: A- s# K# R8 @
下面的梭形，我觉得很有可能是成骨细胞

bty007

回复 wcfeng88 的帖子
) h/ n2 r, F+ Q7 p  B! ?9 a) P" q) V& h# F, O1 y) T
说的很详细，非常感谢~~

wcfeng88

回复 bty007 的帖子
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5 h* J* Z1 J  ?+ O/ |( x       前面的圆细胞应该是活的，但是由于细胞密度不够，细胞会长的很慢，以后要注意调整好细胞浓度，尤其是在原代培养的时候。可以试着加大血清浓度养几天看看情况。
. Z* I$ ]5 [$ ~       虽然细胞量少，但是密度比较大了，可以消化下来传到小一点的培养皿里面，加大细胞密度会长得比较好。

wcfeng88

回复 bty007 的帖子+ u4 x5 D* g! t6 b

: M+ K# O6 I6 B0 D8 z- g% e- s: v每次换液最好都留下一些旧的培养基。消化的时候，倒出旧的培养基，先用少量胰酶润洗一下，倒出润洗液后，再加适量胰酶进去作用一分钟后倒出（仅留一点点），然后放37°培养箱中作用5~15min不等（看情况），作用完后把细胞拍下来，加入三分之二新鲜培养基和三分之一先前倒出的旧培养基即可。最好不要用PBS冲洗，你的细胞太脆弱了。

bty007

回复 wcfeng88 的帖子4 y9 {5 N. B4 G4 V* [

2 W7 u) F' }! x; d5 }还有，请问，是不是每次换液都要留下点旧培养基？我有两次换液还用pbs冲了，这样使细胞长得不好了吗？

bty007

回复 wcfeng88 的帖子
/ S: V' b. n" W* C) P8 k: z4 d" F% r! K2 v( |
谢谢~上面的圆形细胞都是死掉的吗？它们一开始就是圆形的，应该是贴壁了，换液换不掉，不可能再长了吗？
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; i* k) \9 s, {" R: P下面梭形细胞的只是培养瓶几个小范围里长出来的，不是满视野都是这样的，量还很少，不用等它再长长再换瓶吗？就是感觉其它组织块会不会也在慢慢长出来这样的细胞？

wcfeng88

倒数第二张图片的细胞还有救，消化后转瓶培养。换液的时候，留下一些旧培养基，不要全部换掉。