求高手指导我的小鼠bmsc长得怎么样，谢谢

bty007

我用了两种方法取干细胞，①全骨髓法充股骨胫骨骨髓，②酶消化骨片法消化颌骨。4 q+ G+ z+ k1 i+ T8 Z' l
目前养到原代第八天，骨片法长出一点像干细胞似的了，骨髓法还都是圆形的，这样正常吗？
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2 w  h8 |8 @( Y9 }! V" h; L骨髓法24h半量换液，72小时全量换液，之后3天一换。刚接种时细胞很多的，感觉细胞越长越少，是污染了？细胞死完了么？, E% B1 o' \& {; J: d$ i  D% m
骨片法72h半量换液，之后3天一换（下面有梭形出现的是骨片法的，是小鼠间充质干细胞吗？长得正常吗？）
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wcfeng88

倒数第二张图片的细胞还有救，消化后转瓶培养。换液的时候，留下一些旧培养基，不要全部换掉。

bty007

回复 wcfeng88 的帖子# P# |/ X6 ^5 b. _

9 u3 ?* [- W$ t1 d3 X, @谢谢~上面的圆形细胞都是死掉的吗？它们一开始就是圆形的，应该是贴壁了，换液换不掉，不可能再长了吗？
! \+ C8 t- E1 d5 E  M5 P, k. L1 A: P# e6 b
下面梭形细胞的只是培养瓶几个小范围里长出来的，不是满视野都是这样的，量还很少，不用等它再长长再换瓶吗？就是感觉其它组织块会不会也在慢慢长出来这样的细胞？

bty007

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' x6 Q: h3 C1 F3 r% X
5 M1 \9 k& n  U! l9 D4 }还有，请问，是不是每次换液都要留下点旧培养基？我有两次换液还用pbs冲了，这样使细胞长得不好了吗？

wcfeng88

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' L( q, A  \: R' J- N; M
; B7 G8 R0 R3 o/ [  \. m每次换液最好都留下一些旧的培养基。消化的时候，倒出旧的培养基，先用少量胰酶润洗一下，倒出润洗液后，再加适量胰酶进去作用一分钟后倒出（仅留一点点），然后放37°培养箱中作用5~15min不等（看情况），作用完后把细胞拍下来，加入三分之二新鲜培养基和三分之一先前倒出的旧培养基即可。最好不要用PBS冲洗，你的细胞太脆弱了。

wcfeng88

回复 bty007 的帖子7 r+ a* s1 {. ?) K' M$ c, p

/ S3 {, b8 N% \4 a! w7 V2 w% q       前面的圆细胞应该是活的，但是由于细胞密度不够，细胞会长的很慢，以后要注意调整好细胞浓度，尤其是在原代培养的时候。可以试着加大血清浓度养几天看看情况。
2 \. {( S5 O" Q2 R; V; ]       虽然细胞量少，但是密度比较大了，可以消化下来传到小一点的培养皿里面，加大细胞密度会长得比较好。

bty007

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" Y6 J4 z" L2 M' g6 t* P3 p
+ d% k3 ?2 Z6 |7 O$ t6 p说的很详细，非常感谢~~

luoziwei

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1 K9 B1 E* E1 z4 N1 s/ B# f下面的梭形，我觉得很有可能是成骨细胞

bty007

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4 n1 e( i& P$ K* w. \是最后一张图吗？这不是干细胞老化了？
/ b. y) G" J; @+ A8 _1 J( ^- G这几张都是还没传过代的，原代十天左右吧，这么快干细胞有可能分化吗？谢谢