求高手指导我的小鼠bmsc长得怎么样，谢谢

bty007

我用了两种方法取干细胞，①全骨髓法充股骨胫骨骨髓，②酶消化骨片法消化颌骨。+ {( C& h# V6 F' V% Q- i% c
目前养到原代第八天，骨片法长出一点像干细胞似的了，骨髓法还都是圆形的，这样正常吗？
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/ s% U: q" v+ w+ ?& r# k5 k! u5 p骨髓法24h半量换液，72小时全量换液，之后3天一换。刚接种时细胞很多的，感觉细胞越长越少，是污染了？细胞死完了么？0 d& G/ X/ _" f* p2 G
骨片法72h半量换液，之后3天一换（下面有梭形出现的是骨片法的，是小鼠间充质干细胞吗？长得正常吗？）0 u3 w) n& N1 b1 ]4 H' y+ b

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wcfeng88

倒数第二张图片的细胞还有救，消化后转瓶培养。换液的时候，留下一些旧培养基，不要全部换掉。

bty007

回复 wcfeng88 的帖子0 B7 E# s% v: G# s, B0 d
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谢谢~上面的圆形细胞都是死掉的吗？它们一开始就是圆形的，应该是贴壁了，换液换不掉，不可能再长了吗？! n# h0 j. o! W8 ^

9 t( C0 w3 {4 Z* P( y/ Z6 Z下面梭形细胞的只是培养瓶几个小范围里长出来的，不是满视野都是这样的，量还很少，不用等它再长长再换瓶吗？就是感觉其它组织块会不会也在慢慢长出来这样的细胞？

bty007

回复 wcfeng88 的帖子1 ]4 Q( X8 p. [0 {
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还有，请问，是不是每次换液都要留下点旧培养基？我有两次换液还用pbs冲了，这样使细胞长得不好了吗？

wcfeng88

回复 bty007 的帖子6 O1 E8 u: l+ `: }& D) ~+ Z" N

. h' v. l3 V/ @  h9 P4 Z每次换液最好都留下一些旧的培养基。消化的时候，倒出旧的培养基，先用少量胰酶润洗一下，倒出润洗液后，再加适量胰酶进去作用一分钟后倒出（仅留一点点），然后放37°培养箱中作用5~15min不等（看情况），作用完后把细胞拍下来，加入三分之二新鲜培养基和三分之一先前倒出的旧培养基即可。最好不要用PBS冲洗，你的细胞太脆弱了。

wcfeng88

回复 bty007 的帖子, F; V& P4 d" u: r$ u- |. E
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       前面的圆细胞应该是活的，但是由于细胞密度不够，细胞会长的很慢，以后要注意调整好细胞浓度，尤其是在原代培养的时候。可以试着加大血清浓度养几天看看情况。
* A) O' H5 j$ T* c       虽然细胞量少，但是密度比较大了，可以消化下来传到小一点的培养皿里面，加大细胞密度会长得比较好。

bty007

回复 wcfeng88 的帖子0 I2 h* ]# M/ H3 s$ q3 V4 |, p- l7 ?1 k

9 [" I% b+ \% e0 C+ c) X% G  ?3 Y说的很详细，非常感谢~~

luoziwei

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* u6 `6 c* x4 J- @8 V$ z3 Q下面的梭形，我觉得很有可能是成骨细胞

bty007

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是最后一张图吗？这不是干细胞老化了？
) ^! A! o2 [7 E# F* E这几张都是还没传过代的，原代十天左右吧，这么快干细胞有可能分化吗？谢谢