电转小鼠胚胎干细胞的参数设置？

runsong

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$ U" A# Z) Y( I& [& hhttp://www.stemcell8.cn/thread-37899-1-1.html
" S# l) i# X& X) D2 O第一页

echowdk

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: [( g+ F6 K; V0 j# N( _1 k我们实验室用的是BIO-RAD的电转仪，电转介质就用1*PBS，每次电转用的ES细胞数是75万-100万个，电转后铺在10cm的Dish上。  X! g! Q+ O6 {# [/ L1 y4 G. V$ x! r+ p
电转杯用0.4cm的，750ul的细胞+50ul的DNA（共800ul液体）。室温电转，有的实验室在冰上。1 D  T2 }" f* j
电转参数设置：衰减波，电压250V，电容500uF，电阻100欧姆，然后还要设置一下电转杯的孔径大小4cm。

lsjj619

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: S# q) W3 v% ^5 ^: H- t( \9 E# n* [9 f& E" V
你们电转的效率是多少？

echowdk

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$ A6 Y8 {& X6 I% B( H
据我的经验看，电转效率与ES细胞系的背景也有一定关系，当然这只是我的一个猜测。
+ M& p8 E0 z3 A9 J0 v, V2 r" x! i* X反正我做过的两个不同细胞系电转效率就不同，具体效率的话我也没有估算过，但是一般做一次的话肯定会有几个阳性的，也够用了。

lsjj619

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* L4 L6 y% E$ a6 E: Q1 S! M- {+ V3 U0 o6 }+ I. A  w
下载不了，请发一份给我，谢谢，邮箱lsjj619@126.com

lsjj619

回复 runsong 的帖子7 c: ^" X$ O6 i& I& Q( J' P; q
4 s/ U, Q+ N1 u" \: H  {: a2 q
里面有专用的小鼠胚胎干细胞的电转缓冲液吗？

lsjj619

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! c: k. N9 Z$ F9 |. n/ L3 _' e$ W6 c- k8 h0 R
下载好了，不用发了，谢谢