筛选出来的肿瘤干细胞可以稳定的培养吗？比如冻存、传代等

shixiangguang

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筛选出来的肿瘤干细胞可以稳定的培养吗？比如冻存、传代等，还有哪种筛选方法不会影响细胞的活性?一般来讲，从一株肿瘤细胞中筛出肿瘤干细胞需要多长时间？代价高吗？烦请各位高手前辈帮忙解答啊

shewawa

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9 @8 i# B7 K8 P: f3 M! [7 c; c既然是肿瘤干细胞应该可以冻存传代，但是不知道能不能保留干细胞稳定的特性。分离干细胞应该要花很长时间吧，你要用抗体进行筛选，用ARIA进行sorting，这个估计筛选依稀是要很多小时的。我们做过这个实验，但是我看见旁边的同学做这个筛选，都是早上开始染抗体，做到晚上才拿着细胞回来。。。

jack0811

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直标抗体就好啦,很快出来的,加上sorting应该不用那么久吧

shixiangguang

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用ARIA进行sorting是啥技术？我想做这个方面的，由于我们实验室没人做过，我想尝试一下呵呵所以有很多不懂得，希望你多给我讲解一些好吗

新疆八钢

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5 }# z# K, h+ D" C8 E, s$ [8 ]4 S9 d+ y
分选出来的肿瘤干细胞可以冻存传代，但是不能保留细胞的干性。一般分选后的CSCs应该立即实验，CSCs可以通过不对称分裂，分裂出nCSCs。分离CSCs的时间和你需要的细胞系CSCs的含量和分选条件有关，SP分选时间较长一点，Marker分选法时间相对较短。
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shewawa

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  \7 X  ~" G( b& f! Q% j% K对不起没有说清楚，说的是BD Biosciences FACSAria分选细胞，实验原理和普通的流式细胞仪差不多。不用这个机器，可能用MACS beads也可以进行分选。这个实验我没做过，所以没什么经验，等有机会做一下。下面的那位新疆同学，估计经验丰富，你可以向他请教。

shixiangguang

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( j, T! z! ]4 y: u0 G3 N" W5 z
哈哈，谢谢你的点拨

shixiangguang

回复 新疆八钢 的帖子7 @8 O; b0 T. E2 B1 ~# S' m0 g
7 [8 y' r7 `$ q2 G5 Z$ P4 U! Y
那CSC无法建立稳定的细胞系的情况下，每次实验岂不是都要重新筛？重新证实其干性？再说每次筛出来的肯定不尽相同。。。。这工作量太可怕了。。。您们一般筛CSC是从组织还是细胞系？需要多久才能筛出来？

新疆八钢

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6 R& y* h' `9 h3 G) `* s- O: J  F* }4 M' j0 l* a2 F8 j/ p
一般情况下如果进行干细胞生物学实验，每次实验最好都要分选新的CSCs，当然分选条件必须一致，这样可以不用每次都验证干性。干细胞课题目前最大的障碍就是工作量大，需要的细胞数量很多。我们从新鲜组织和细胞系中都筛选和分选出CSCs，一般从预实验到正式实验需要3月左右，不包括CSCs的生物学实验时间。

shixiangguang

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哦我晓得了，谢谢，据我所知现在做CSC的回报不是很大，投入产出失调，高分文章不是很多，有的人按照几种分子MARKER就说其是干细胞了，然后做下游实验，而这些作为干细胞的MARKER又不断的有人进行质疑和推翻。。。个人感觉很混乱