关于DC-CIK共培养

yanlu98

给位前辈，我想向大家请教一下一般DC在培养后第几天和CIK共培养，共培养时怎么收集DC，我看到以前的帖子，有前辈说用冷盐水冲，为什么要用冷盐水呢，那是多少度的盐水？而且用盐水冲过了之后要离心再把细胞收集起来移到CIK里面吗？希望各位前辈不吝赐教，越详细越好啊！

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,
+ g  ]! b% z% |# F你真聪明

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,, ]4 d% U9 I$ Y4 H1 i
你真聪明

yanlu98

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还想请教一下大少爷，用冰生理盐水冲就是为了让细胞收缩，那我直接用4度的1640冲，冲完了直接加进CIK里，就不离心了，可以吗？

yanlu98

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还想问一下大少爷 你说的“直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止”，那剩下的梭型细胞是什么呢？还想麻烦你能不能发几张你养的DC给我学习学习呢？

yanlu98

回复 大少爷 的帖子$ r6 J: M( s3 c/ G7 ^# I: [

0 {) z# f( q3 L. _# s& Z非常感谢大少爷！！

大少爷

DC细胞培养第六天/第七天，在显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养。! P$ y( o+ k8 H2 V+ I

$ Z3 Z- x/ k' P$ f) V% lDC细胞收集：将贴壁细胞培养瓶中的培养液混匀后，转移至50 ml（或250 ml）无菌离心管，
9 b  L: d4 H  s立即向培养瓶加入10ml 4℃预冷的生理盐水，迅速晃动和吹打，立即移至离心管，重复上述步骤，- @. ^% l- U1 r  G5 H6 w4 I
直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止。. l9 ~" W( G# c3 ]* T4 |
将收集好的DC悬液离心（300g，12min，RT）弃上清，用移液管加生理盐水将细胞液稀释，# j, u# \- r/ x7 ?2 l& t# S
混匀，离心，上清去掉，用培养基重悬细胞，加入悬浮培养细胞中与悬浮细胞共同培养。7 _5 l9 Y+ q! s) ?: g
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冷盐水刺激DC细胞收缩，便于从培养瓶上脱落，也容易吹打下来。不能用细胞刮刀或细胞消化液，对细胞损伤太大。