ips诱导和培养中的2个疑问

sizhengliu

各位大侠！小生有疑问，多多指导：0 [/ i, T7 e. U
1，关于血清：在ips的诱导重编程阶段，克隆还未出来之前，这段时间可以使用胎牛血清吗？（gibco的澳洲血清）这对感染后细胞的增殖有无帮助？对克隆的出现和形成有无负作用？
. H- ~. |/ V& G& o" v4 U/ d+ f2，关于筛选：在细胞感染病毒后，需不需要进行药物筛选？在克隆形成后，需要怎样筛选合适的克隆进行扩增？  }( z" }+ e  z6 @

frankieisme

1.诱导重编程阶段中血清是必须的;4 H+ o  `4 R; j6 Q% Y5 K
2.在细胞感染病毒后，需要G418和嘌呤霉素筛选各一次,在克隆形成后不需要筛选.

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子. o- C( M- n! i- J
' h/ k& f8 H( k
1.克隆未出现之前一直需要血清么？不是感染的时候（两到三天时间）含血清，之后换干细胞培养基么？
: |6 d  N0 @* U) F! E# O/ Z

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子- _" H1 `' z% s* Z; `) V3 ^

9 y, k) s" J8 S! Z0 D还有就是，血清的作用机理？

sizhengliu

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0 I5 ]+ S" |6 p  m7 l3 t$ W: ^
0 @& x( ]8 U7 P1 T' D, O8 K& a: b1,胎牛血清最晚可以用到什么时候换?2 D+ L0 _" j6 U) M8 s: w
2，感染后，嘌呤霉素筛选可以终止的条件是什么？
* d( e9 W0 {6 p谢谢！

frankieisme

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3 k, V3 E% c: b; F7 }3 [1 B% l+ d, w: p! J' U" }* m
不管是FP medium或者ES medium都含血清,只不过前者是10%,后者是15%;
. `" t' j0 l/ |) Y. G$ Q4 I嘌呤酶素一般在G418筛选后第4天用,只用一次,之后就每天更换新鲜的ES medium,等到克隆长出来.

frankieisme

回复 huangcong1988 的帖子1 v, d" g; s8 M5 p) L6 \/ b

7 }/ i2 u+ x% X7 o! z  d4 I  ~  u6 A! |' eES medium中也含有15%的血清啦.

zmm

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7 M3 r, D% D) F  f
6 T7 B9 B# O; V2 m您的细胞是什么物种的？细胞感染后我一般不筛选，而形成克隆后，用活细胞染色进行筛选！

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子! f+ b+ I- ^/ _& C' [- j

: O+ V9 ?: `) M, b' T$ h您是养小鼠的吧？

huangcong1988

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* M1 U- B& i% C
# t0 m0 Y! T" F+ P3 u1 @染色之后克隆还能用么？