ips诱导和培养中的2个疑问

sizhengliu

各位大侠！小生有疑问，多多指导：
5 p3 Y% v& b% z( R  ?, h0 a1，关于血清：在ips的诱导重编程阶段，克隆还未出来之前，这段时间可以使用胎牛血清吗？（gibco的澳洲血清）这对感染后细胞的增殖有无帮助？对克隆的出现和形成有无负作用？
5 s6 l" K, \  C0 i- f/ p8 N" l" @2，关于筛选：在细胞感染病毒后，需不需要进行药物筛选？在克隆形成后，需要怎样筛选合适的克隆进行扩增？
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frankieisme

1.诱导重编程阶段中血清是必须的;
9 o8 X, W8 p; Z6 B; z2 ~2.在细胞感染病毒后，需要G418和嘌呤霉素筛选各一次,在克隆形成后不需要筛选.

huangcong1988

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9 @7 j) |9 l% ~& X: _: d# N. f+ J! _" B9 C; X9 u+ r0 r
1.克隆未出现之前一直需要血清么？不是感染的时候（两到三天时间）含血清，之后换干细胞培养基么？8 O0 B# D6 r; h; h/ x5 j$ ]# Y  m

huangcong1988

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9 W! u7 R" I  G) T还有就是，血清的作用机理？

sizhengliu

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. d" O% [+ Z% o; f4 q- g! f
  Q# F5 y) E$ Z/ Q6 k1 {1,胎牛血清最晚可以用到什么时候换?3 o8 ?9 @1 i+ b/ f5 G* f' @0 J
2，感染后，嘌呤霉素筛选可以终止的条件是什么？# F5 Z$ C% M# Q
谢谢！

frankieisme

回复 sizhengliu 的帖子0 Y! P2 _% w7 }5 w( d& M
' W5 q- m5 Z8 G$ L& M
不管是FP medium或者ES medium都含血清,只不过前者是10%,后者是15%;
' O/ }, H& Z- ^1 Z嘌呤酶素一般在G418筛选后第4天用,只用一次,之后就每天更换新鲜的ES medium,等到克隆长出来.

frankieisme

回复 huangcong1988 的帖子1 M. h2 y. f& D9 z" K. X+ x. h8 F
8 H2 ~, O! s& k4 x
ES medium中也含有15%的血清啦.

zmm

回复 sizhengliu 的帖子$ v( B, J* ]! \, ?; F- o8 {' v

4 l4 L/ f) @/ ]: [% g4 [" t" E您的细胞是什么物种的？细胞感染后我一般不筛选，而形成克隆后，用活细胞染色进行筛选！

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子( W3 `7 r( N0 F3 U' F+ H

+ l6 ^3 j3 {! [/ \& V您是养小鼠的吧？

huangcong1988

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% t1 K% N3 ~) j& |8 F
1 C- t0 N7 G" p9 a染色之后克隆还能用么？