求助各位大神，我想做有关神经球的双标免疫荧光

changbo529

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8 _7 K3 ~; {) b& _; \0 R- H0 B各位大神，我想做有关神经球的双标免疫荧光，不知道都应该注意哪些问题，求指导，谢谢

dianying

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5 h; e% g8 c3 h% q$ K% \# w* I; s& j1 ?0 {- h- u
可以。
. a" t* i3 ]  ]  H8 k* U8 ztriton 100x 5ul 加 5ml 1xDPBS 8-10min。

asa_ok

只做过单细胞的xyz，没做过神经球的，球内层的细胞能triton打孔到吗？

dianying

回复 asa_ok 的帖子4 J& \/ y5 p0 k$ s; T& S" b

) W$ O% C2 B, f1 V/ |9 t不会。) \/ x5 q: `, W* A- d, q
神经球下摇床，不涂胶就能贴壁。在染色过程中你用Triton只要打了孔，染进去没问题。只是你照像时要用共聚焦xyz，然后叠加起来就行。

asa_ok

但问题是神经球贴壁不是很好，每次液体漂洗会损失很多的吧。
! m7 {- @, B; ^% g0 e球是一个立体的，染色是不是只能染到球的最外层细胞呢？

changbo529

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1 h8 b9 b" D- T1 r& Q
0 f& O4 Q7 I. n3 m- B谢谢。我做过单标的，实验下一阶段要做双标，所以先提前做准备。仍然很感谢你。

dianying

回复 changbo529 的帖子' [1 c( ?- q8 L
8 q' ^5 s3 n1 P  S  \% t) j5 _
帮你找了个大鼠组织的单标中文视频，你需要双标就把两种不同属种的一抗加在一起就行，二抗加相应的就行。我只做过人和小鼠的，应该通用。
4 X* ]& v; A" y4 K+ @* s1 i或许等我有时间再帮你找找。9 |0 Y( Y( D* D
1 I5 u) @2 K% X1 T2 n
http://v.youku.com/v_show/id_XMTY1MTI4OTY4.html

changbo529

回复 dianying 的帖子( I! @. Z7 ~8 g3 [0 U" l

4 ?9 ?  G0 @& u4 O7 F' r也许是水平有限吧，我在网上没有找到太多关于双标的Protocol。谢谢你

dianying

回复 changbo529 的帖子6 ]+ U# j- R- k

* ^% F+ t/ c( l  N1 t- r我没做过大鼠，Protocol在网上也不应该难找吧。指导更谈不上，在染色上也是菜鸟水平。
2 g/ B$ |4 G# ~$ ^4 G1 s# n4 A& L5 g封闭通常用BSA 或者NGS。
9 q4 i7 T+ z; \6 n5 }7 z0 ^( T9 n
( B9 X' L9 M1 e

dianying

回复 changbo529 的帖子
* c6 @( @+ b& h! K# X- x6 W+ i: F( _$ ~3 n/ z
Example:
8 H1 V( O( D: i5 f- d- n$ i$ k
# n+ W" y  U: t1Ab: Polyclonal rabbit anti- Rat; 2 ?. i2 J% Y$ L* P+ ?6 l* b, D
2Ab: Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit or Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit
* l3 V) x% A# C3 d3 t  Z( h( e0 m7 t1 d( ~/ ?6 k
1Ab: Polyclonal mouse anti-Rat; 7 s7 h& e1 y+ w: @; c
2Ab: Alexa Fluor 488 goat anti mouse or Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit0 |' U2 y7 z2 y) v2 t
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