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[讨论] PCR克隆基因,引物没错,没有产物啊 [复制链接]

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楼主
发表于 2012-6-19 16:06 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
PCR按照TAKARA试剂盒(DR101S), 加入MCF7细胞的cDNA量3ul(我试验结果显示MCF7细胞中Notch3高表达),其他按照试剂盒。设定的循环是: 94℃,5min; 30 cycles of  98℃, 10s; 50-62℃, 15s; 72℃, 2.5min; 72℃, 10min;4℃, →. 试验后琼脂糖电泳,从左边的marker算起是50℃-62℃,1%琼脂糖。
) Z' ?' K9 I/ ?结果如下:
: s. R5 j, E6 L4 z2 Q1 c
, @( e7 l! @" j* p- q" uPCR没有任何产物,应该是1979bp。讨论:1)引物没错;
$ U* p- d7 ^5 t7 J7 `The forward primers:
# S4 u- c' }" E# ?3 z. {+ M& l5’-GCAAGCTTGCCACCATGGTGGCCCGGCGCAAGCGCG-3’
: C8 m' c- n: m( e! Dand " {1 ?5 ?, f- b& V
the reverse primer 5’-GCGGATCCCAGGCCAACACTTGCCTCTTGGG-3’
1 v" Z- u& E$ ?# z2 ^! f9 _* C& P; O2 C" o
大家帮我分析下原因吧,谢谢
2 Z: s0 z) H- ^& ], _& G
" u: q! U1 b, n, |' {$ G! A* i7 ~' r& u. P
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沙发
发表于 2012-6-19 17:16 |显示全部帖子
试验要求用小于200ng,我用了400ng。cDNA测定了浓度,
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藤椅
发表于 2012-6-27 08:54 |显示全部帖子
谢谢weiyepan了

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板凳
发表于 2012-6-27 08:54 |显示全部帖子
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谢谢weiyepan了
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