PCR克隆基因，引物没错，没有产物啊

weiyepan

50~62做的是梯度PCR，引物足够长，Tm应该比较高，PCR退火条件没有问题。
  t. z1 t! M4 W5 ]& O问题在于：
4 E- ?6 O# Y3 {# U) E1 f2 c1. cDNA并不是加的越多越好的，400ng我不知道你做多少微升的体系，反正我感觉加个50ng就够了，你做个稀释度下去，肯定比你加的多要好；
0 ^! Y2 X; ?; K2 ?2. 你所说的高表达是QPCR结果还是WB结果？如果是QPCR结果可能这样的情况就比较诡异了，如果是WB结果可能是你RT没做好。0 b' L  @" v+ U! P4 v
3. cDNA的浓度不知道你怎么测的，如果是电泳的话，结果比较可靠，如果是读吸光，那偏差就大了，建议跑个胶看看。