hiPS传代时的消化问题

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今天传代用胶原酶消化30min后 feeder全晃下来了，iPS继续消化了20min也下不来
0 C& ?" |& C. u9 g2 I0 G' m酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml& |5 W" I- B% C0 k  L3 T
怎么回事，大家遇到过吗

Jonathan

问题很多啊。1 feeder 太密，2 克隆形态太差 3 消化时间过度 4消化后是用枪头或者啥的刮下来

fwj81

饲养层好像密了点，我们用0.05的胰酶消化5分左右就好了，且传代生长很好呀，检查下是不是哪个环节出问题了

jcb

为啥不在胶上养。便宜很多。 传代，dispase 比较好。消化六七分钟，洗三遍然后用玻璃移液管切成小片。7 x1 P3 C2 q  W

第一心音

建议直接挂下来

gexiaoyatou

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7 N) ?# W4 }5 v- [- B
$ [  s, O  D, ^( S7 ]' j  X/ K- R是哪个公司的dispace，可以推荐下吗？大体消化到什么程度呀？

也行天下

       feeder太密了！iPS克隆中间的细胞好像已经有分化了吧，这可能也是iPS克隆消化不下来并且细胞较散的原因吧。$ V, p7 Y5 n9 Z) [- E4 c
    我们用胶原酶消化一般40-50分钟至iPS克隆明显卷边，即使克隆完全消化下来了细胞也不会像图中的那样散。+ B% `( s3 S2 i# @

fguw

比较标准的是，DMEM/F12（1：1）" ]8 y: Y+ m; z. ^2 ?* r# n% h
因为基础培养基就是这个，
8 ]; x- U" n- [: g+ ?我们实验室做过实验，发现这个最好，

573639471

回复 fguw 的帖子; d" K0 q: e# Q! z9 o: S# H7 u8 a

# H! I: R9 H- D% l0 @5 N% f配的有什么问题？除了不应该用PBS还有吗

白巧克力

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# e1 E# i- U# v! U5 Z
& ^- A# g1 M+ LGibco的，具体与楼上BNJN相同。