hiPS传代时的消化问题

573639471

今天传代用胶原酶消化30min后 feeder全晃下来了，iPS继续消化了20min也下不来 6 k# p( U8 h  k
酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml, j8 s& P5 Q# m$ j
怎么回事，大家遇到过吗

573639471

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7 f" X2 A: j. p3 @: f5 t- e% V* w* c2 t$ I+ _
有图为证

开心果王

貌似feeder有些密啊，看到你的克隆消化后都散掉了，这样传代效率不高把！可以不用消化这么久，看到有些卷边就可以用枪头刮下来了！

wwy551

消化确实太久了，这样对ips克隆不好，我们都很少等克隆自己脱落的，一般消化5到10分钟就可以用1ml的移液管刮克隆了

fguw

酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml' ？
  R" ^! `! N; _  X$ [3 ~  X我觉得你配的有问题，你用PBS，还是DMEM/F12 配的？
1 [1 @3 m, w4 n& ?7 b不会是培养基吧？
; x, L' z6 B/ X% h应该用DMEM/F12

wang3033

feeder是用鼠尾胶原制备的，消化当然没有问题，IPS细胞团之间的连接不是靠胶原蛋白连接，所以细胞团散不开，其实你的胶原酶没有问题，而且消化已经过头了

白巧克力

你的feeder layer好密啊... ... 我买的不是sigma的，不知道大家用的是不是都是；而且我发现，用没用完的collagenaseIV（用剩冻起来再化开用）消化会比新的慢些。

490096812

我觉得可能是你的胰酶有问题，是不是有血清污染了啊

BNJN

我用的是Dispase，消化5min左右，再用枪吹下来。

zmm

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7 X9 J/ @0 `* L% Q( O/ M  o$ X* c" n* q
我觉得你的feeder太密了，这样会导致你hips状态不好。依我看你那克隆大小不用传代，可以在培养两三天。消化的时间基本在5min就可以了。还有你这个是人源的feeder吧？