求助：培养CIK细胞时候怎么去除红细胞？？？高人解答，谢谢

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好的，谢谢大家的回答，我还有2个问题想问一下，刚刚接触，问题比较多，呵呵
9 B6 d3 K9 \6 ]4 i6 n- d# V4 n4 N3 E1.培养基的使用，我们实验室以前一直使用DMEM培养间充质的，我查文献上面说养PBSC需要用1640培养基，请问用DMEM可以替代吗？两者培养对PBSC影响大吗？# y+ v- |" m! Y  T: H
2.我前天提的PBSC（外周血单个核细胞），放在直径100mm培养皿里面培养，48H后换液观察发现有一些点状贴壁，请问一下PBSC贴壁是不是也像间充质干细胞一样一开始呈现梭形，谢谢！

大少爷

外周血提取单个核细胞的时候，选择合适的分离液，合适的离心参数，多洗涤几次，红细胞就应该去的差不多了
0 w3 x( [7 M5 B，然后经过十几天的培养，扩增，收集时的洗涤，离心，在洗涤，红细胞会去除的比较干净。
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# N1 J/ h9 d+ b另外，如果培养扩增后的CIK任然有许多红细胞时，也不能用红细胞裂解液裂解，扩增后，由于细胞量0 l- T; S4 M" y. f9 _
太大，对裂解液的量以及红细胞裂解的时间根本不好把握，而且会对CIK细胞有很大的伤害，造成的后果
6 P1 Q  ~8 u3 K/ _+ f可能很严重，不建议裂解。
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5 W- }, f* m5 q$ z3 k外周血培养的CIK如果用于临床治疗的话，也只是用于本人，有红细胞也没什么问题。而且即使是脐血培养的，
3 K7 ?  c6 H+ i" _) L& N% g6 Z: ~* cCIK回輸时一般要求十的九次方以上的细胞量，有少量的红细胞也是是没事的。
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, S3 Y% }! E! g$ t; M如果实在是要裂解的话，建议在提取单个核细胞以后裂解，加入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，吹打混匀几十秒，
7 F6 j9 r; C- L& X1 D9 F待悬液的红色变淡时立即加盐水终止裂解，混匀，然后离心。效果会好点。
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麻烦再问一下二楼的大神，我用的红细胞裂解液说明书上写再入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，混匀，然后离心，不知道哪种方法对，麻烦您解释一下，谢谢

yaolinzhang

提单个核细胞的时候红细胞就沉淀去掉了就

evial

离心沉淀细胞团后加入红细胞裂解液，冰上放置5-10分钟，经常震一下，然后加PBS15-20倍体积离心后就能去除，沉淀下来的细胞团是白色的，这就成了。当然裂解液质量也是要考虑的，用流式专用的比较好。