求助：培养CIK细胞时候怎么去除红细胞？？？高人解答，谢谢

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好的，谢谢大家的回答，我还有2个问题想问一下，刚刚接触，问题比较多，呵呵; w, ]3 g9 U8 \3 O; U  |% }
1.培养基的使用，我们实验室以前一直使用DMEM培养间充质的，我查文献上面说养PBSC需要用1640培养基，请问用DMEM可以替代吗？两者培养对PBSC影响大吗？
! x* a' m& d4 j5 s+ `$ I3 v# K2.我前天提的PBSC（外周血单个核细胞），放在直径100mm培养皿里面培养，48H后换液观察发现有一些点状贴壁，请问一下PBSC贴壁是不是也像间充质干细胞一样一开始呈现梭形，谢谢！

大少爷

外周血提取单个核细胞的时候，选择合适的分离液，合适的离心参数，多洗涤几次，红细胞就应该去的差不多了
& n, d0 d( D0 k; f5 L7 S1 ?，然后经过十几天的培养，扩增，收集时的洗涤，离心，在洗涤，红细胞会去除的比较干净。$ P& J4 r1 f/ K* Z2 E
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另外，如果培养扩增后的CIK任然有许多红细胞时，也不能用红细胞裂解液裂解，扩增后，由于细胞量. I1 k  D5 q. \
太大，对裂解液的量以及红细胞裂解的时间根本不好把握，而且会对CIK细胞有很大的伤害，造成的后果
# B- Q& s# r+ ^$ |可能很严重，不建议裂解。: k8 U, k' K3 `/ l! E/ `' G& V/ K

- U9 Y& e  ]$ u外周血培养的CIK如果用于临床治疗的话，也只是用于本人，有红细胞也没什么问题。而且即使是脐血培养的，- j+ @8 u5 v: ~9 P1 \# c
CIK回輸时一般要求十的九次方以上的细胞量，有少量的红细胞也是是没事的。8 L& c# ?9 ^5 g+ o& h6 X# {

1 p  I6 B- b; v7 t4 a$ E如果实在是要裂解的话，建议在提取单个核细胞以后裂解，加入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，吹打混匀几十秒，
' g4 A- I' d9 J- ~/ A待悬液的红色变淡时立即加盐水终止裂解，混匀，然后离心。效果会好点。
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麻烦再问一下二楼的大神，我用的红细胞裂解液说明书上写再入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，混匀，然后离心，不知道哪种方法对，麻烦您解释一下，谢谢

yaolinzhang

提单个核细胞的时候红细胞就沉淀去掉了就

evial

离心沉淀细胞团后加入红细胞裂解液，冰上放置5-10分钟，经常震一下，然后加PBS15-20倍体积离心后就能去除，沉淀下来的细胞团是白色的，这就成了。当然裂解液质量也是要考虑的，用流式专用的比较好。