求助：培养CIK细胞时候怎么去除红细胞？？？高人解答，谢谢

113305060

我做CIK细胞培养，首先提取外周血单个核细胞，但这里面会混有红细胞，接种到培养瓶中培养，取悬浮细胞继续加生长因子培养，但是取悬浮细胞的时候还是有红细胞在里面悬浮啊，而且以后换液传代都是取悬浮细胞，那么红细胞不是一直都混在里面吗？用红细胞裂解液2次仍然去除不了红细胞，求高人解答，谢谢

evial

离心沉淀细胞团后加入红细胞裂解液，冰上放置5-10分钟，经常震一下，然后加PBS15-20倍体积离心后就能去除，沉淀下来的细胞团是白色的，这就成了。当然裂解液质量也是要考虑的，用流式专用的比较好。

yaolinzhang

提单个核细胞的时候红细胞就沉淀去掉了就

113305060

麻烦再问一下二楼的大神，我用的红细胞裂解液说明书上写再入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，混匀，然后离心，不知道哪种方法对，麻烦您解释一下，谢谢

大少爷

外周血提取单个核细胞的时候，选择合适的分离液，合适的离心参数，多洗涤几次，红细胞就应该去的差不多了
  |' P  {5 V" f9 q" I，然后经过十几天的培养，扩增，收集时的洗涤，离心，在洗涤，红细胞会去除的比较干净。4 S: o* |$ g9 z3 ~. S: c

$ ~$ L# L8 s+ q另外，如果培养扩增后的CIK任然有许多红细胞时，也不能用红细胞裂解液裂解，扩增后，由于细胞量
3 z' x, ?/ \. L7 K7 A太大，对裂解液的量以及红细胞裂解的时间根本不好把握，而且会对CIK细胞有很大的伤害，造成的后果
  N, M+ L5 n' c可能很严重，不建议裂解。
! i5 f% S. S' }8 o; a* J: n6 E8 r2 }+ y5 X- N  b
外周血培养的CIK如果用于临床治疗的话，也只是用于本人，有红细胞也没什么问题。而且即使是脐血培养的，5 Z2 a4 H) v4 a. a5 w$ }9 ~1 T
CIK回輸时一般要求十的九次方以上的细胞量，有少量的红细胞也是是没事的。- q3 Q0 Y+ s5 }* X0 }

7 {" M! Y7 A' x( l2 E如果实在是要裂解的话，建议在提取单个核细胞以后裂解，加入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，吹打混匀几十秒，& D, u: K' ?3 E6 U5 s
待悬液的红色变淡时立即加盐水终止裂解，混匀，然后离心。效果会好点。
2 C) Q" m4 P# s0 b3 \1 i  O& {3 H/ |

113305060

好的，谢谢大家的回答，我还有2个问题想问一下，刚刚接触，问题比较多，呵呵
( q- Z- A8 L+ G$ H2 ^. z1.培养基的使用，我们实验室以前一直使用DMEM培养间充质的，我查文献上面说养PBSC需要用1640培养基，请问用DMEM可以替代吗？两者培养对PBSC影响大吗？
0 x% y1 C" j7 O8 a8 {2.我前天提的PBSC（外周血单个核细胞），放在直径100mm培养皿里面培养，48H后换液观察发现有一些点状贴壁，请问一下PBSC贴壁是不是也像间充质干细胞一样一开始呈现梭形，谢谢！

evial

一种是直接破红，在血液里加入裂解液，是用于检测，因为要加说明说体积的裂解液。另一种使用分离液提取，这样基本就已经去除红细胞了。不知你用的是哪种。

细胞海洋

回复 113305060 的帖子3 m& x1 l: G' H# g- C3 S/ W; v; Z
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你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样3 Y; b; n% l6 O+ k" {

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, l3 j$ Z" I! }另外建议重新发个贴子提问 这样问 很少有人能看到

113305060

回复 细胞海洋 的帖子5 P( W& I2 P8 a2 [6 Y
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好的，谢谢

zuming

关键看做什么用，如果是给病人回输的，混有一点点红细胞是无所谓的，不影响。没必要除掉。