关于EB体外诱导分化的问题

your1024

想请问一下，mES悬浮培养形成simple EB之后，想在六孔板里进行体外定向诱导分化，怎样把EB接种到孔里呢？是直接用EB贴壁，还是把EB打散了之后再贴壁呢？接种的EB数或者细胞量是怎样的呢？诱导分化的话，是贴壁之后再加定向诱导液，还是悬浮的时候就可以加诱导液了？那天数怎么算呢？还想请问一下，EB贴壁之后还能传代不？谢谢！

wawj

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六孔板先铺明胶，把ＥＢ拿枪小心吸出来种到板里，不能打散吧。那做了一整不是白做了。每个孔里放三到五个EB（这个还要根据实验需要）。看你是加何种诱导液，作用机制主要是在那个阶段。一般悬浮的时候就可以加了。小小意见，仅供参考。

Helena110

                             

your1024

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再请教一下，EB长大了可以达到肉眼看到的地步么，还是在体视镜下面用枪吸？如果是要提RNA、蛋白这样的检测，你估摸着要用几个EB呢？多谢，多谢！

your1024

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) H2 T7 E" w2 _' Y( K/ t5 h8 y: o, q' y! ~给点意见撒！

wawj

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& Q( b; r, K: p# D" {* [$ Y" b肉眼可以看以，白色的小点点。提RNA的话，５０-６０个。蛋白没做过，你可以试试。我一般是用10cm的培养皿做ＥＢ，一个皿的EB都用来提RNA。" R* H- Q) {4 `
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your1024

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那是不是就是直接把ＥＢ铺在10cm皿上然后再诱导、检测了？

wawj

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最好放到孔板里做诱导分化，也省液体。你是怎么形成ＥＢ的，悬滴还是悬浮？

your1024

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放孔板里怎么叫一个10cm的皿都来提RNA呢？我是两步，先悬滴两天，再悬浮3天，不知道改怎么叫。。。

BNJN

如果要吹成单细胞，我用的是accutase，往神经分化的。