关于人脐带间充质干细胞的几个问题

leostar131

1.在消化细胞时，若终止不完全，即消化过头了，是否对细胞有很大损伤7 a2 @1 W, |: m. u2 q
2.间充质干细胞注入0.9%的NaCl中，过半个小时左右会出现絮状物，这样正常吗？
0 ^5 E* [5 u7 I  D/ S3.当天取的脐带必须要当天做原代细胞制备吗
5 H& _8 @; s! c# n* M5 l& @) g7 n4.为什么皿中细胞总是长不均匀

pailishi

1.消化过头肯定会损伤细胞的
5 |* h: O  t+ A3 V$ B& g2.我们这样做过动物实验，可能是浓度较高的原因所以没有看到过絮状物？5 ?! e+ X9 M$ }7 C/ {
3.不一定啊，放几天都没什么问题
" B, b& {! `' R# R0 t  R" {4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的

上帝帮我转运吧

1.不知道用什么酶消化的，酶不一样消化时间也不一样。用胰蛋白酶消化过头对细胞损伤比较大6 Y0 y: U" ~" g
2.出现絮状物不一定说明有问题，正常情况下也会出现的。& t0 o$ Z( z) F( {2 e3 z
3.最好早点处理，不是当天也可以
7 K8 c% f$ N' o# H6 `4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的，但是我们常用机械法做。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。" B& X- v* W8 E) j8 s5 s, ^( g8 I
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。8 L+ {/ [5 i# y) O) q% t
3.不是的，放置几天没事的。- ^) n# r7 j* [8 L4 v* F
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。9 A) ~0 I2 O) m. k, P! S0 ?
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。- {+ ^) a) l( j8 v, V
3.不是的，放置几天没事的。5 w" V" B0 f3 ?8 Q1 i
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

肖特

1.消化过头对细胞有损伤，损伤的细胞传代后可能会死亡而漂浮在培养基中，通过换液可以除去。
2 E) c5 Z, w* o# Q2.絮状物有可能是有死亡裂解的细胞，细胞内的DNA大分子释放出来或形成粘稠絮状，但是具体由什么原因导致有待楼主自己确认。2 }+ }* F5 e' h' R- K' X- \
3.脐带离体后暂时不处理的话可以置于在生理盐水或者培养基中，4度保存。保存多久还能用，这个不清楚，但是最好24h内处理。
) ]! m# x1 l& @( `4.皿中细胞不均匀，可能因为接种之前细胞没有混匀，或者培养箱放置不平导致皿中培养基分布不均，培养皿放入培养箱中之后注意观察培养液是否一侧多一侧少。

王超

我比较赞同楼上几位的观点，关于第四个问题我个人的见解是，首先，用胰酶消化得到的细胞不见得都是单个的，有的仍然是数个细胞在一起的小团块，也可能夹杂着组织间质，所以细胞生长时出现聚集现象；其次，细胞各自的状态不一，不排除不同细胞所处生长周期不同的可能。总体来讲，比起组织块培养，用胰酶消化后种植的细胞密度比前者均匀得多。

leostar131

回复 漂泊的风 的帖子9 K& C9 ?; n, E* e; @
. S& h) m# C" n! B7 L1 a1 F
有可能也是我们的培养箱有点歪的原因吧，每次总是一边多一边少。还有加胰酶是不是必须要加终止液啊，终止液可以是什么

leostar131

回复 上帝帮我转运吧 的帖子1 w5 n# F8 W. T* x2 g6 S7 I5 h& B
0 {/ A* C$ F1 W  D9 a1 N
我在显微镜下看有的细胞已经死掉了，好像DNA都裂解出来了

leostar131

回复 肖特 的帖子( R3 S6 S* x/ c/ I

; R' E. n1 A, s% ]; ?! A是的，这位大侠说的每条都很准确，对我非常有用，我现在很郁闷的事，现在我把胰酶稀释的比例更大了，终止液也加了很多了，可注入盐水袋中5分钟后还是会有沉淀。我还想问一下，是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊