关于人脐带间充质干细胞的几个问题

leostar131

1.在消化细胞时，若终止不完全，即消化过头了，是否对细胞有很大损伤: S$ ^1 s7 Y6 k! w9 x9 r! m; i4 B
2.间充质干细胞注入0.9%的NaCl中，过半个小时左右会出现絮状物，这样正常吗？, N- N7 @( D% v- }$ @$ V
3.当天取的脐带必须要当天做原代细胞制备吗, M' W+ z5 J2 B& m) O4 l
4.为什么皿中细胞总是长不均匀

pailishi

1.消化过头肯定会损伤细胞的
7 S8 j1 |/ O: Z' [* {2.我们这样做过动物实验，可能是浓度较高的原因所以没有看到过絮状物？/ C/ J3 X1 P7 _. H1 b
3.不一定啊，放几天都没什么问题8 v$ E7 T% b  Y# }- Z
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的

上帝帮我转运吧

1.不知道用什么酶消化的，酶不一样消化时间也不一样。用胰蛋白酶消化过头对细胞损伤比较大" b+ o7 L% O) [$ {! P' L
2.出现絮状物不一定说明有问题，正常情况下也会出现的。
9 W9 s+ ~" K5 `7 p2 H! I3.最好早点处理，不是当天也可以
5 e3 |7 ^. G" y8 o% D4 E0 p4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的，但是我们常用机械法做。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
3 _# R/ B* o; M( a6 B3 h2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。
; A( e! Y6 Z5 m4 Y9 {  D' M3.不是的，放置几天没事的。
- H$ |7 q: ?0 U* o8 ]1 o4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
9 B7 v2 I+ b# v2 b* X1 p  ~2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。
! V1 g" k( X' Q5 u" A7 k1 A9 v3.不是的，放置几天没事的。1 u% j" j9 B7 o8 Z( S; L- P
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

肖特

1.消化过头对细胞有损伤，损伤的细胞传代后可能会死亡而漂浮在培养基中，通过换液可以除去。: w7 r+ v0 I' Z3 g2 ~/ h7 I$ ~1 k
2.絮状物有可能是有死亡裂解的细胞，细胞内的DNA大分子释放出来或形成粘稠絮状，但是具体由什么原因导致有待楼主自己确认。
* _6 Q1 j& ~) I- U( J3.脐带离体后暂时不处理的话可以置于在生理盐水或者培养基中，4度保存。保存多久还能用，这个不清楚，但是最好24h内处理。
! |# j) z9 ^4 e4.皿中细胞不均匀，可能因为接种之前细胞没有混匀，或者培养箱放置不平导致皿中培养基分布不均，培养皿放入培养箱中之后注意观察培养液是否一侧多一侧少。

王超

我比较赞同楼上几位的观点，关于第四个问题我个人的见解是，首先，用胰酶消化得到的细胞不见得都是单个的，有的仍然是数个细胞在一起的小团块，也可能夹杂着组织间质，所以细胞生长时出现聚集现象；其次，细胞各自的状态不一，不排除不同细胞所处生长周期不同的可能。总体来讲，比起组织块培养，用胰酶消化后种植的细胞密度比前者均匀得多。

leostar131

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4 E0 Z8 ]; e& ?1 H0 v% A; l
) Y# r) t2 b& y# y; v有可能也是我们的培养箱有点歪的原因吧，每次总是一边多一边少。还有加胰酶是不是必须要加终止液啊，终止液可以是什么

leostar131

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$ K9 n/ \0 s  g+ z9 W3 ^8 K3 P2 r% Z! B* W8 e$ {
我在显微镜下看有的细胞已经死掉了，好像DNA都裂解出来了

leostar131

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/ [# c3 A% q; Q/ T5 E
) W- S: e8 d6 @是的，这位大侠说的每条都很准确，对我非常有用，我现在很郁闷的事，现在我把胰酶稀释的比例更大了，终止液也加了很多了，可注入盐水袋中5分钟后还是会有沉淀。我还想问一下，是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊