关于人脐带间充质干细胞的几个问题

leostar131

1.在消化细胞时，若终止不完全，即消化过头了，是否对细胞有很大损伤
( B5 T. h5 [; s2 L/ ~" p+ @2.间充质干细胞注入0.9%的NaCl中，过半个小时左右会出现絮状物，这样正常吗？
8 V/ b" z5 o" Q, ]( n. g3.当天取的脐带必须要当天做原代细胞制备吗: k& |& z7 w, ^' A3 A
4.为什么皿中细胞总是长不均匀

pailishi

1.消化过头肯定会损伤细胞的& M# }& A5 a/ }/ y
2.我们这样做过动物实验，可能是浓度较高的原因所以没有看到过絮状物？5 D0 h3 w5 W, h5 G2 E
3.不一定啊，放几天都没什么问题
: k" _$ f" ?; ], m4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的

上帝帮我转运吧

1.不知道用什么酶消化的，酶不一样消化时间也不一样。用胰蛋白酶消化过头对细胞损伤比较大
# Q$ Q$ t& t! o/ q2.出现絮状物不一定说明有问题，正常情况下也会出现的。" q: A/ m, z1 h. Z& @1 F
3.最好早点处理，不是当天也可以0 B$ ]6 J- ?/ c2 x2 A  P- C
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的，但是我们常用机械法做。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
6 p  A7 O6 y: h# u  k9 `% e2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。& P* P1 V3 C& g! `: C! ]; W: p' f. e
3.不是的，放置几天没事的。
& G- U; ]: |, n0 m. F( n6 X4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。0 m" }: X9 Y5 ?
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。2 W1 r. f; g( Y3 p  d) Z$ q9 n3 y: {+ v( `
3.不是的，放置几天没事的。
" Z' C, O8 m4 j4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

肖特

1.消化过头对细胞有损伤，损伤的细胞传代后可能会死亡而漂浮在培养基中，通过换液可以除去。
+ d# R8 p& o' U" u' m, p% S! B2.絮状物有可能是有死亡裂解的细胞，细胞内的DNA大分子释放出来或形成粘稠絮状，但是具体由什么原因导致有待楼主自己确认。
7 P  {! ~9 j" M/ c* ]2 C" W6 q3.脐带离体后暂时不处理的话可以置于在生理盐水或者培养基中，4度保存。保存多久还能用，这个不清楚，但是最好24h内处理。
" _+ ]3 _/ h0 A+ y( l( b; q9 H( {4.皿中细胞不均匀，可能因为接种之前细胞没有混匀，或者培养箱放置不平导致皿中培养基分布不均，培养皿放入培养箱中之后注意观察培养液是否一侧多一侧少。

王超

我比较赞同楼上几位的观点，关于第四个问题我个人的见解是，首先，用胰酶消化得到的细胞不见得都是单个的，有的仍然是数个细胞在一起的小团块，也可能夹杂着组织间质，所以细胞生长时出现聚集现象；其次，细胞各自的状态不一，不排除不同细胞所处生长周期不同的可能。总体来讲，比起组织块培养，用胰酶消化后种植的细胞密度比前者均匀得多。

leostar131

回复 漂泊的风 的帖子" k( o+ O- g+ M5 M

1 j7 p$ Y/ \* a2 w! m有可能也是我们的培养箱有点歪的原因吧，每次总是一边多一边少。还有加胰酶是不是必须要加终止液啊，终止液可以是什么

leostar131

回复 上帝帮我转运吧 的帖子
' s) _$ U  `! @; _6 a
7 S  n9 p  C  K$ Z" y我在显微镜下看有的细胞已经死掉了，好像DNA都裂解出来了

leostar131

回复 肖特 的帖子- ?; \! w) |8 N1 G) v* e
! ^0 i, i, L! l/ ?
是的，这位大侠说的每条都很准确，对我非常有用，我现在很郁闷的事，现在我把胰酶稀释的比例更大了，终止液也加了很多了，可注入盐水袋中5分钟后还是会有沉淀。我还想问一下，是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊