关于人脐带间充质干细胞的几个问题

leostar131

1.在消化细胞时，若终止不完全，即消化过头了，是否对细胞有很大损伤  Z( C, S4 t, ]$ V
2.间充质干细胞注入0.9%的NaCl中，过半个小时左右会出现絮状物，这样正常吗？  E; T$ _9 o" L* e
3.当天取的脐带必须要当天做原代细胞制备吗
2 A* X1 ~1 ~7 N5 y5 W2 M4.为什么皿中细胞总是长不均匀

pailishi

1.消化过头肯定会损伤细胞的
( v7 q% g# J! H" n2.我们这样做过动物实验，可能是浓度较高的原因所以没有看到过絮状物？
0 F6 `: G3 Y5 L/ |2 ~% w3.不一定啊，放几天都没什么问题
( o& M' q- c/ V, q  C4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的

上帝帮我转运吧

1.不知道用什么酶消化的，酶不一样消化时间也不一样。用胰蛋白酶消化过头对细胞损伤比较大8 K# E) ^8 B, f# n: i8 y1 T6 a
2.出现絮状物不一定说明有问题，正常情况下也会出现的。! @/ n4 i, _9 M4 A, I, n, ]
3.最好早点处理，不是当天也可以8 i3 C/ ~: x. q
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的，但是我们常用机械法做。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。/ I9 B( G- X' b' A; W
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。- C& V% U3 ~0 @( z" Y9 ~) ^
3.不是的，放置几天没事的。1 h  C% U& w( X. c7 r; E
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
2 \+ H: G# K* l2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。/ ?3 V, g0 S* }9 ?
3.不是的，放置几天没事的。0 Q- W& w% [+ z) c8 K
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

肖特

1.消化过头对细胞有损伤，损伤的细胞传代后可能会死亡而漂浮在培养基中，通过换液可以除去。1 H+ [% d+ `2 U1 a
2.絮状物有可能是有死亡裂解的细胞，细胞内的DNA大分子释放出来或形成粘稠絮状，但是具体由什么原因导致有待楼主自己确认。! o+ s: U( Y8 _2 l
3.脐带离体后暂时不处理的话可以置于在生理盐水或者培养基中，4度保存。保存多久还能用，这个不清楚，但是最好24h内处理。
8 H4 r  A" g7 q7 Z( ^  |4.皿中细胞不均匀，可能因为接种之前细胞没有混匀，或者培养箱放置不平导致皿中培养基分布不均，培养皿放入培养箱中之后注意观察培养液是否一侧多一侧少。

王超

我比较赞同楼上几位的观点，关于第四个问题我个人的见解是，首先，用胰酶消化得到的细胞不见得都是单个的，有的仍然是数个细胞在一起的小团块，也可能夹杂着组织间质，所以细胞生长时出现聚集现象；其次，细胞各自的状态不一，不排除不同细胞所处生长周期不同的可能。总体来讲，比起组织块培养，用胰酶消化后种植的细胞密度比前者均匀得多。

leostar131

回复 漂泊的风 的帖子# r9 t! @* O9 ^5 H1 S4 j# C% n

3 ]# I. v3 z& S# f! O: Q有可能也是我们的培养箱有点歪的原因吧，每次总是一边多一边少。还有加胰酶是不是必须要加终止液啊，终止液可以是什么

leostar131

回复 上帝帮我转运吧 的帖子0 Y. B& |4 r8 `3 ~% B  T

) h2 v2 N9 ?1 Q& |4 J6 u) J% c我在显微镜下看有的细胞已经死掉了，好像DNA都裂解出来了

leostar131

回复 肖特 的帖子
& F2 b8 C/ v8 ~/ f% W% }- H/ U
1 c* |" `! O4 o- b& m是的，这位大侠说的每条都很准确，对我非常有用，我现在很郁闷的事，现在我把胰酶稀释的比例更大了，终止液也加了很多了，可注入盐水袋中5分钟后还是会有沉淀。我还想问一下，是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊