现在开始准备养小鼠成纤维细胞，请前辈们赐教。

暗红色的风

我准备要开始诱导IPS细胞，现在第一步养小鼠成纤维细胞。我定一周大小BALB/C mice，组织块培养法：从师兄那里得到的Protocal  请大家分析补充。谢谢。在冷的PBS中将尾部皮肤剪成1mm3的小块，真皮朝下贴在干的100mm培养皿，放入培养箱15min等组织块上的PBS干后（防止漂浮），每个组织块滴100ul 左右的FBS培养过夜。第二天加入10%FBS的培养基，大约4-6天成纤维细胞长出组织块。消化传代，用3-5代的细胞感染。同时请问大家成纤维细胞的培养基：普通的DMEM，10%FBS. 双抗。请教成熟的培养方法。谢谢。

牙牙丫丫123

我一般是在处理时用双倍双抗的浓度~

暗红色的风

回复 yuhaoze 的帖子
( I6 `% M1 N0 S$ S; n
, p5 u2 h4 M  g3 L" n" d5 F5 Q呵呵，反正是比我资历老啦，我先看能培养出成年鼠的成纤维细胞的话，下一步就准备培养胚鼠的成纤维细胞，期间就包装病毒，现在也很担心病毒包装的事情，什么都没做过心里没底，请问您第一次大概花了多长时间培养出IPS细胞？因为之前做了很久实验，都没成功，心里现在很挫败感，现在又刚接触IPS就更迷茫中了，所以还得请您多多赐教呢，跟大家多学习。感谢！

暗红色的风

回复 rainnyshine 的帖子
. {! m3 }2 ]6 Z2 d- B% f9 }6 ]1 e; l$ J! X( x/ b# s
2*双抗是指500mlPBS液加20ml双抗吗？因为我们是买的配好的双抗，平时500ml培养基加10ml 双抗 但是不知道PBS加双抗怎么配，谢谢赐教

yuhaoze

暗示啥前辈啊，哈哈。你太客气了，可能我用的老鼠跟你们的品种不一样，所以价格不同。我用的是封闭群，你用的是近交系，你的老鼠遗传背景更稳定所以贵。要么就多买点老鼠回来自己配吧，两只母的一只公的，放一个笼子里面，过十几天肚子就大了，很快

yuhaoze

我什么都不加，就用PBS洗一遍，还没有染过菌。从肚子里面拖出来的东西一般没有什么菌，只是小心不要碰到皮毛，也不要戳破肠道

rainnyshine

双抗不是关键，主要是材料要做好消毒工作，一般2乘双抗洗涤吧

暗红色的风

回复 yuhaoze 的帖子; N1 i5 T) I3 u7 H' U3 d# ]2 z8 l/ R/ h
6 V$ \+ |& K$ h* Y# r
急切请问前辈PBS加多少双抗？明天就准备做了，现在还没配好加PBS的双抗，请前辈赐教。谢谢！

暗红色的风

回复 yuhaoze 的帖子, x' r3 P2 f4 u. G- v) {

- N0 z' c9 {. h! E, s太感谢前辈了，我真的是新手，现在换课题，准备做IPS细胞，然后在实验室的时间就只有1年多，所以现在很迷茫，我们这边动物房 我问了C57孕鼠要220元一只，成年的BABL/C小鼠也要20元一只，所以我就不敢一开始就买孕鼠。后面还得请前辈多多指教！

yuhaoze

如果做ips用胚鼠成纤维细胞来做的话，饲养层和被诱导细胞是一样的，都是MEF。胚鼠在我们的药检所是20块钱一只，在大学附属医院动物房买8块钱一只，不算贵吧，其实也不用那么精确时间12-14天，你买三只肚子鼓鼓的那种，肯定有一只能做出来。一般一只母鼠怀7-8只，甚至更多，足够让你用一阵子。我上半年做过这块东西，现在挺熟练的了，有什么事情尽管找我就行了哈哈