菜鸟的烦恼

余冬冬

        小弟是刚做的精原干细胞相关课题，因为过去不是弄这个的，所以很多都不懂，菜鸟一个。希望各位大侠能给些指导和建议。
& M" w; z/ ]4 \- y8 U" d. t        我按照机械分离和酶消化法分离提取到的小鼠精原细胞，再每隔近40min差异贴壁，一般差个3、4次，但是从那之后，基本上细胞就没啥动静，也不知道该不该换液。各位都是几天换一次液，换液时需要离心吗？原代细胞要不要加抗生素，一般多长时间会出现克隆呢？我用的是普通的DMEM,一般是10%的血清，没有加细胞因子，但是感觉细胞基本不长。
1 _+ w# p" U: C0 {( L# O

pailishi

应该加生长因子的

素心无痕

如果不添加生长因子，细胞如何进行定向生长？你的DMEM是不是仅仅用于对照会好一些

chenchunlei

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1 V6 M0 Z' n% U0 X3 C
8 s) G. n* ^: J楼主几天的小鼠消化的？

余冬冬

6-7dpp

余冬冬

回复 素心无痕 的帖子& L9 }% }# S1 m) @8 ]* h0 {8 Q
4 h9 ~1 c, p' |; H: m6 e' Y
我也想加，可是老板让我先不加试试，看能否出现克隆团，而且，我也不需要定向分化，只要能将干细胞富集，形成克隆团，接着就转染病毒了。关键是，养了那么多天，也没啥动静。

余冬冬

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( t5 e% ~+ t8 m$ s3 p8 W' U8 f0 H+ M. J
出生后6-7天的小鼠，昆白系。

chenchunlei

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0 P3 Q3 {" v3 d; R. v( M! F1 o3 l. A; x' ?/ Z, |  s# M
楼主贴壁后
! e& R/ m* S# h  U阳性率能达多少？1 n: t' a( x. Y# T. w2 n, y8 L+ i7 E

余冬冬

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* v! g% Q, C  f! r' m5 R! N: g
% d  s8 e0 @3 S请教一下，你说的阳性率是指？

hcluo

' ?& [0 @9 b: w- B$ `9 X  f) s/ B0 W  @6 q3 }
建议采用Brinster提供的经典的分选方法，就是利用SSCs的特异性表达标志物Thy1做MACS分选，这样可以提高细胞分选的纯度，而且饲养起来相对要容易，这样可以尽可能的排除Sertoli 等细胞的对SSCs生长的干扰。另外，细胞培养的时候还是建议使用饲养层以及加入一些生长因子，比如LIF，GDNF等。祝好运。