菜鸟的烦恼

余冬冬

        小弟是刚做的精原干细胞相关课题，因为过去不是弄这个的，所以很多都不懂，菜鸟一个。希望各位大侠能给些指导和建议。
% R/ C: a3 f7 v- S6 ]1 B        我按照机械分离和酶消化法分离提取到的小鼠精原细胞，再每隔近40min差异贴壁，一般差个3、4次，但是从那之后，基本上细胞就没啥动静，也不知道该不该换液。各位都是几天换一次液，换液时需要离心吗？原代细胞要不要加抗生素，一般多长时间会出现克隆呢？我用的是普通的DMEM,一般是10%的血清，没有加细胞因子，但是感觉细胞基本不长。% b! b0 s5 U1 h& z1 q3 _# s" }

pailishi

应该加生长因子的

素心无痕

如果不添加生长因子，细胞如何进行定向生长？你的DMEM是不是仅仅用于对照会好一些

chenchunlei

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" A5 p1 b, L* J, M楼主几天的小鼠消化的？

余冬冬

6-7dpp

余冬冬

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2 r! c% F  n3 C5 ~! o我也想加，可是老板让我先不加试试，看能否出现克隆团，而且，我也不需要定向分化，只要能将干细胞富集，形成克隆团，接着就转染病毒了。关键是，养了那么多天，也没啥动静。

余冬冬

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0 F$ U- S# J7 E0 g, }% }
出生后6-7天的小鼠，昆白系。

chenchunlei

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8 b7 L/ z9 f( A
/ C) N2 H8 s$ P& ^* }) M楼主贴壁后% j) u! _  f) @0 A9 U7 a" O
阳性率能达多少？& }$ e, \9 N7 l- N" Z

余冬冬

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' q7 A' n1 o, y& m: P$ Y
$ t' I  _/ N7 j  e2 Q) v4 G6 B2 G8 T请教一下，你说的阳性率是指？

hcluo

9 I( Y/ `! f0 ~
. f4 [; k' C6 h) R# O  M
建议采用Brinster提供的经典的分选方法，就是利用SSCs的特异性表达标志物Thy1做MACS分选，这样可以提高细胞分选的纯度，而且饲养起来相对要容易，这样可以尽可能的排除Sertoli 等细胞的对SSCs生长的干扰。另外，细胞培养的时候还是建议使用饲养层以及加入一些生长因子，比如LIF，GDNF等。祝好运。