MEF原代 第一次传代

wawj

这次做的ＭＥＦ原代，状态很好，种了六个Ｔ７５大瓶，昨天是第三天，传代，冻了５管，传了一瓶，一传二。奇怪的是，今天看传的那两个大瓶液体变得很黄，飘得细胞较多，贴的也还可以。不会是污染吧，那冻得那几管是不是也不能用了。9 f- }% Z* Y% g/ f) K9 X) b8 b' p
分析原因：
# C/ @$ w. _5 W. d5 P& n, o１，昨天传代时细胞量比较多，每个瓶子接种的细胞都比较多，会不会因为细胞比较多，增殖较快，液体一天内就变黄了。' Q: W$ Y+ {4 {. b$ S; F' O- D
２，昨天传代时上一瓶高糖ＤＭＥＭ刚好快用完了，所以用新配的高糖ＤＭＥＭ，不会是这个液体有污染吧，今天已吸了一点液体放到离心管里培养，明天继续观察。
# c8 T' M5 |8 S, B３，以前还没出现过这种情况，今天看到液体很黄，怕是污染，不知道该扔不，就把两瓶细胞都传了，种了一个大瓶，其余细胞扔了，继续观察中，不知道这种处理对吗？请高手指教。
" Z7 j4 ^+ ?% ^2 M  e. r5 a6 g8 ?3 e

jiefengbing

液体变黄太快可能是细胞数量有关，你仔细观察下你那飘得是细胞还是很密的细菌？一般来说MEF到第三代状态还应该不至于飘起来。

akxiaoqiang

回复 wawj 的帖子1 _4 U: L- B4 z! Q4 n- R

( q0 e& o) i( f/ l8 z5 ^& t" V染不染菌镜下一下子就看出来啦

wawj

回复 jiefengbing 的帖子
  [; y3 R0 o6 w3 q
2 X% R0 b+ a4 x+ T5 h5 T; {. X0 O没污染过  不知道  感觉跟以前飘得细胞不一样  细菌飘起来是啥样

wawj

回复 akxiaoqiang 的帖子; _0 P; f" K- ^

& N) I( Y7 y! {- c2 E+ h. d$ _咋看呢，求赐教。以前没遇到过

wawj

回复 jiefengbing 的帖子3 W* k1 j0 z+ T/ C# B
! o. \( n3 \  U% z
今天其实还仔细看了，不像是细菌，但因为没见过，也不清楚。还有一个小细节，今天传代时细胞很难消化下来，不知道有什么提示没，消化步骤都跟以前一样。

chentian820

与其找原因，还不如把培养基什么的过滤除菌，然后再做一只老鼠。节省时间。

wawj

回复 chentian820 的帖子  n- Y0 d, z& R( L, G- C# k

/ G, n8 w) i* p4 \' V5 F说的也对，就觉得这只老鼠白白牺牲了。刚冻的细胞能拿出来复苏吗，效果怎么样？想复苏一管，看那些冻得细胞是否也污染了。

wawj

回复 jiefengbing 的帖子
7 a8 a# l( R8 n( _4 H0 E) P0 a) q# r6 q2 Y6 @. b6 \
被您猜中了，昨天传代，今天一看，液体又变黄了，基本没贴壁的，飘得是很密的细菌，感觉还在动，是细菌吧，还是什么更恶心的污染。我把细胞扔了，昨天放到孵箱的离心管的液体没变黄，但也不能排除有污染，准备重新配液体。冻得细胞想复苏一管看看，如果也污染了，就要重新做老鼠了。又得重来一次，深恶痛绝的污染啊！

刘森泉

回复 wawj 的帖子( M  K! C& A: L% P

0 U7 ?# b* A% M) ~4 M什么方法做的MEF，状态比较好。能分享一下吗？谢谢。