细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

yuhaoze

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3 I$ U- H- h2 q! m5 |. c# e最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。
6 z1 z6 ?: \8 o+ t- Y5 Q不知道问题出在什么地方，怎么解决
* ~0 g, F, g- \: T% p+ `; n0 @大家有没有遇到同样的问题

coffee.cat105

你用的什么公司的胰酶、

yuhaoze

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# u- l/ K. [- P+ u/ g# B6 t$ U9 G6 ]0 w
sigma,一直都是这个，你觉得是胰酶的问题？$ @3 r8 d% p8 c$ N+ s$ w3 \

yuhaoze

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$ Z& Q! B3 i+ b
加上之后倒还真是能看出来有点类似凋亡的特征，但实验室其他人说胰酶很好用啊

coffee.cat105

我们用Hhclone的胰酶也出了问题了，形态什么的都可以，就是流式检测抗体标记不上，正头大呢，所以问问你7 x6 u: t' ~, }! z9 p

WAX

你的胰酶是不是粉末自己配制的，如果是，有可能是过保质期，胰酶失效了，消化能力差，损伤了细胞却消化不下来，我们以前遇到过类似的情况

yuhaoze

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. p, {! Q# }' y7 u& O6 w: T
" [  }6 T4 [& ^5 J! J
如果是这样的话那真需要警惕了

WAX

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9 r8 [% a$ F/ j% h+ e粉末也是会过期的，用个两年就差不多了，买一瓶新的吧

yuhaoze

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! c0 Y. K; c: A! R3 ]$ x) z: d3 m好的'谢谢

wangzhiqi86

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2 h" d' @* H# r8 ^; w3 ]
# R4 c" K( p+ F2 y) j极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。, j* \3 p4 {+ n. s# p
我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。
: n( c( l+ t, ~2 V' T胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。