脐血MSC的分离！为何Ficoll的单核细胞层如此不清晰？（附图）

wangzhiqi86

1.不知道你的500g是多少转，3000 rpm左右吧
  A8 X) T& y( ]* Y: A# [& D0 \. N2.离心开始和结束时都要用最慢加速度和减速度的程序7 e" U8 Q$ Z( E
3.细胞悬液要逐滴加到Ficoll上面，一定要慢，不能混合
7 R( w& A& [5 k2 V6 Y4.确实要取白膜那一层，因为MSC就在里面，你轻轻摇晃50 mL离心管可以看到白色层在轻轻晃动  F: b! C, R* q
5.1.077g/L的比重分离MSC没问题

wangzhiqi86

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6 I* o2 L0 x7 V. {) a1 m% G) v8 Z. }$ ~# o
我做的是骨髓的，和脐带血的可能还不一样。1 K8 O9 J* N* r6 K# ^
我之前也尝试用肝素来防凝血，但没用，最后索性直接用PBS去冲骨髓了。
! R4 F. g  ^" N7 L个人觉得是转速不够，该离的没有离下去，我用的实验室的分血程序，2790rpm，它们是用来分造血干细胞的，也有有文献报道是3000rpm，你不妨一试。

wangzhiqi86

都是等渗作用，只是PBS的离子更多而言，没有太大差别，提取的步骤很多文献都有报道，你查查看。

wangzhiqi86

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% z. K% O( E0 [/ l, ^9 r# u' B5 V( ^: m5 L& D* `! K1 b7 T5 r- Z
离心转速3000rpm没问题吧，个人觉得加速和降速应该用最慢的，因为这是密度梯度离心，重要的是保持每层细胞在淋巴液里面的稳定性，太快了容易造成各层间的混合。
. S" O- [, V% [( l& n/ \: Z中间白膜层直接加到培养基里培养就行了吧，不知道后面再次离心的目的是什么？