MEF用丝裂霉素C处理第二天就崩盘

刘森泉

MEF用丝裂霉素C处理第二天就崩盘，用的是海正药业的临床注射用丝裂霉素C，加的浓度是10ug/ml 一小时或7ug/ml 3小时。有没有人遇到过这种情况，望解析。

dwy

我用PBS和DMSO溶解的，暂时没有问题。

开心果王

我一直用的是海正的，没有发现细胞全死掉了的现象，我们一般处理后就消化计数并冻存起来了，并没有继续培养，只是在复苏后会发现有死细胞漂浮，但贴壁的细胞还不错啊！我是用PBS配的，不知道楼主是否某个环节出现了失误还是什么其他的原因，可以将自己觉得疑惑的地方跟大家分享一下。

bibottll

我才做过的，细胞长得很好啊，5微克/微升，PBS溶解，处理三个小时后用PBS冲洗5-6次

wbj1983

上面的丝裂霉素C是：sigma-M0503-2mg的8 X6 s2 Y% {  t7 E2 t
打字的时候打错了，非常抱歉！

wbj1983

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7 J: r2 W6 `( M- x7 v1 O; E6 E5 M" c. W& Y0 _
1、MEF传代次数一般P3-5，不适合用代数太高的。  k8 ]" e# f. D" B( w0 l; W" I
2、丝裂霉素C最好用sigma-M0403-2mg的。/ `; x. I1 [; b/ k& E6 u; ^0 W6 J4 b
3、2mg丝裂霉素C先用PBS溶解均匀，一般避光混匀5-10min，再加到培养液中，工作浓度10ug/ml。
0 f' \: Z6 k) s6 p! b4、处理时间2-2.5小时不能超过3小时。注，处理2-2.5小时后用PBS洗2次，此步骤很重要！
( X0 y/ c, y1 D& I" k- I- |! y5、冻存时如果经费充裕的话可以用10%DMSO+90%FBS，效果能佳。! E* O. y. w. c2 \7 X
这是自己做Feeder的经验，大家可以参考，如有问题可以继续交流。

wbj1983

1、MEF传代次数一般P3-5，不适合用代数太高的。* x, f" O" e* G; M6 Z% c
2、丝裂霉素C最好用sigma-M0403-2mg的。
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5、冻存时如果经费充裕的话可以用10%DMSO+90%FBS，效果能佳。
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刘森泉

回复 huangcong1988 的帖子% \# w0 n8 }. M, \' u

1 `9 L  ~) p. `; @用同样的方法冻存下293T这些较好养的细胞，证明冻存方法OK的情况下只能看你的细胞状态了。

huangcong1988

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& ^  `# F; [. P" @4 ?7 E0 s! Y8 l) Q6 }0 T5 x0 ?
还有就是我分了MEF之后冻存，结果怎么复苏也复苏不起来怎么回事呢？程序冻存盒，冻存液也很好

刘森泉

回复 huangcong1988 的帖子  g8 A  e* Z! `

+ m3 |: g! R  ~7 y: ^5 \+ b: T污染得原因多种多样，不能确定，能做的就是把PBS，胰酶，培养基全部换掉，重新复苏细胞试试。