骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下( h- p- L/ o- ]6 i
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
* t+ b% d3 {. Q% I2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；, t5 V. O7 Y) ~  c& }4 o4 W' V3 f  [& T4 c
3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
! A' G( l3 A- ~# G  o4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
' B6 Q- g  |& ]# e( {  ]$ _5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
: u" t9 N7 [0 V  {/ [各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

winstonsee

没有讲怎么分离的，什么分离胶？如何纯化，有没有做表面抗原鉴定

lindanmiaoyao

回复 细胞海洋 的帖子
! Q4 R" M+ p* X+ {# T5 h3 G9 _, e2 t) g! ^- U+ k5 K% N
好的，谢谢楼主

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子, m5 u/ P7 z2 `1 T; |7 B
! \/ q$ G# V9 y# C6 P
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lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子
( x# V, x$ |7 E, }5 L: g
9 t( l8 y  a7 V' S有利于贴壁，最好用进口的。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

关于接种密度问题% Z( m( e6 r3 Q2 G5 F
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种: n( A1 [% D+ k2 z
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

wcforever126

今天说下无菌观念吧) G: p7 p. M. ^' w$ Z
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；8 y5 s2 \2 W9 k. U$ L
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。* ?% K* M4 a" b0 z
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。0 j1 d) e% l0 @3 K/ h
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。