骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下' @$ w# x  d* s, L4 A! |
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
5 r% V' j7 z) K% M& {2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
( I. Y4 T- A5 s, y3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加7 |' G: _1 f7 r1 {" @" r
4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；5 G3 p8 J. U: U9 T
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。% ^/ H* L$ l! s: j/ g6 z
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。8 `1 g1 ^2 {4 Z% j3 d
首先从分离细胞说起吧，
+ d! E( Z4 V& T0 Y: m0 Y我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，
4 X! ^+ V' G7 q; }2 ^1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；: \. T+ o1 s! V# H3 [5 P
2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心
$ V: t2 C5 z( |- {( A8 t& X3、800g。20分钟，20度% U2 c2 c" {( m  x+ J! w+ [6 N
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积- Z( ^/ c5 e3 I7 ]" k9 b
5、300g,10分钟，4度，重复一次& w4 v' e/ ~8 D& M8 D9 R
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧3 d3 l( W9 `- _: R& o1 ^' f$ A
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
' O, {* b5 h8 y  g& X7 ]2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。8 m/ `$ d8 P# E. z) B8 |4 f
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。7 z0 y" r, d0 W- h# Y
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题
8 @0 ?9 o3 s6 E& q2 g1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
( E; p7 K4 v) V( K- j2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子6 ]0 \6 C0 G$ E0 H
$ S; T& N3 C9 B% {
有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子
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