骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
$ o3 l- D* X) c) h, y' }1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
  v: u2 T8 b  s5 J; W+ [2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
6 Z4 H. n$ T" k7 I5 b3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
* ?: u; ~7 J. O* @# k4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；" G4 m& ~9 M, B+ @0 u! k( i8 x2 \" s' H( M
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。' u; q$ Y$ Y$ ^; Y/ W. o1 h
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。" ~& L; Q/ H5 {* E
首先从分离细胞说起吧，
7 \9 n. J" r4 u( {, }/ ?我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，
5 G: D* c, n1 a' \3 L) F9 ?1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；: U" x0 `+ Z1 g- R6 Z5 i
2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心: k3 i" `% ?/ s, J2 E; m
3、800g。20分钟，20度
2 ]* }% ?# z: K4 C7 |4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积
; b$ d& P0 e) I! M5、300g,10分钟，4度，重复一次% c" y. q4 Z$ A! y0 b
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧+ b2 u  X( a5 M1 q6 ~5 A% n
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
. l* |9 Z/ z. P. T& @2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。) c% e( A" z+ }- p: |1 u: ?
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。6 Z- d4 B9 {+ o, _
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题7 d0 `4 t% D  o5 l+ y( x$ o$ O
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
6 ]5 d) m! H8 H% f: J( b  C2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

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4 V7 H- D: {. l+ E+ W8 a2 G' V5 r! W有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

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