关于mES N2B27 feeder-free serum-free培养

vegetax4132

& U) F" p0 B( z& }, b
' b# @" m5 Y% g
最近想建立mES的 feeder-free serum-free的培养体系
, c) ]+ f8 k' M) C结果发现细胞传入N2B27培养基中大量不贴壁。但克隆球都是活的，再移到feeder上也都能长起来。
+ v- e  A, Y3 u1 n# {! K大家有遇到过这种问题吗？
4 a- {4 T5 Q. ?& q3 o, d
! K: A. n! y) |. \  R我用的培养基:
' {7 b: I' B  @, VN2B27+LIF+2I+β-巯基乙醇+Glutamax+双抗      3 X! T& \; \! D
看YING QL 06年的那篇protocol中没加非必须氨基酸和丙酮酸钠，我也就没加。
/ e% b5 E/ q# j. L5 O- A
! J. e; E% V# n- R. u在N2B27中， 图中圆圆的小球基本都没贴壁：4 E, |3 w/ N8 K8 N2 G

2012-8-8 21:45 上传

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% r8 x' O) f) n! p# A7 C将图中小球移入feeder  血清中，就都贴壁了：" L& Z7 k9 m4 n1 g* h

2012-8-8 21:41 上传

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zmm

回复 vegetax4132 的帖子/ z# V6 `7 j+ Z" a: Z
( a: O9 n* a, Q0 X6 h. d3 h' W
你需铺些基质，克隆就会贴壁了。

vegetax4132

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' }8 M; `3 K6 v! o, B4 Q% w# |. t% }4 s! s1 x- B( y( Z
基质？  是什么啊？   

frankieisme

回复 vegetax4132 的帖子, y; s! ~' H9 m/ j; W

0 N" H+ y& j+ w( E% M& t有一种"matrigel"

vegetax4132

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4 B5 x+ M" B4 X4 ], |1 Q# D4 w( S3 S1 _
哦      是一种比明胶更好的胶吧？   听说过   4℃铺  37℃会凝固   是这种吗？

zpzp0312

: L0 y; @* X% x5 J9 I3 n, F4 ]
2 U6 Q9 S% Z$ \3 s( Y
其实你这种转移到饲养层上的细胞球也已经有分化倾向了8 k7 h* ^* V8 M2 c8 ~
另外，matrigel我们使用过，只能说效果不明显
' G6 e" P5 U& Y' |当时我们使用的是ESGRO feederfree medium
: A1 B5 e5 W7 }: n9 K% D7 e& b) @$ N效果和楼主的这两张图相似
' ]4 ]1 l: c$ i# {% K" a# v% J在matrigel上面也不能很好贴壁，有大量的细胞球似乎和基质有些黏连，但适当晃动就会飘起来6 d- ~* x* f7 s0 i2 c4 F
转移到饲养层，就可以发生贴壁，但是也有分化倾向
  i  P0 i5 C( q  A5 {( }) u" o但如果直接使用饲养层培养添加这个培养基，细胞生长状态还是不错的. N7 x% i4 z! g
feederfree效果不满意

zmm

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2 q7 u3 z8 L! R( v! Q" ?: Y1 r1 G6 X
; u. W4 M0 T/ q7 V明胶等都可以

vegetax4132

回复 zmm 的帖子% L$ f) S+ U  W: e
& H  x: {- j/ `6 j' c
我是铺了明胶的，
1 M: x! [$ y5 i" k7 k9 ?' M1 N4 J最近听说再铺一层血清就能贴壁了，试了下真的基本都贴了，不过这样克隆长的很慢了。好几天天都不见长大。。。

vegetax4132

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3 [( y$ W4 c% a) h  ~) y' U! i0 t
. V" z+ f) k+ a, {2 ?: F  ^$ c4 e谢谢，    不过ESGRO也是一种类似N2B27的培养基吗？      
+ b: D# M$ U: v! J我用N2B27+LIF 加上feeder，  发现克隆形态不好，feeder有大量死亡   

zmm

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  L1 E1 t/ l. u# Y$ R8 v/ t5 @% V' c
血清也可以。因为不含血清，所以克隆增殖较慢