关于mES N2B27 feeder-free serum-free培养

vegetax4132

: H, Y/ Q8 V+ j& |5 Y/ A2 ~" R# c
2 d0 p9 i5 F, O9 v3 k9 Y最近想建立mES的 feeder-free serum-free的培养体系0 }2 Q+ N$ d+ p. `: i
结果发现细胞传入N2B27培养基中大量不贴壁。但克隆球都是活的，再移到feeder上也都能长起来。2 U2 s6 d: B; i6 j4 }
大家有遇到过这种问题吗？
/ D! X/ ]  O9 }1 D/ [9 h: Z1 o+ E$ p4 I
我用的培养基:4 S4 J( E/ Z$ s0 m
N2B27+LIF+2I+β-巯基乙醇+Glutamax+双抗      
) }1 G: f( N* D: z* f看YING QL 06年的那篇protocol中没加非必须氨基酸和丙酮酸钠，我也就没加。$ X6 b7 r( J' \" E! J
- J7 y8 L& _3 N( y' K& @+ M) q5 h
在N2B27中， 图中圆圆的小球基本都没贴壁：* T7 J9 @4 J3 ]# s9 a, c0 _

2012-8-8 21:45 上传

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9 `. x8 O) g6 M  d" O+ N+ j; |
将图中小球移入feeder  血清中，就都贴壁了：
9 L) |- S# r: [0 d

2012-8-8 21:41 上传

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zmm

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# W' |5 d7 c: b, \8 _  B6 Z9 k+ s( ~$ z% s& n4 v
你需铺些基质，克隆就会贴壁了。

vegetax4132

回复 zmm 的帖子# R: Q9 x1 C3 @2 G: m7 T0 Z
+ }, F; o3 f! u8 |/ ~( E4 S
基质？  是什么啊？   

frankieisme

回复 vegetax4132 的帖子" M+ w8 T" r/ D5 x/ O

. k9 \$ w6 U3 T/ r& T0 k有一种"matrigel"

vegetax4132

回复 frankieisme 的帖子/ d" h0 n- B2 Q  t$ w6 g

9 K5 [0 U( c5 ?2 z% h% D& @/ A哦      是一种比明胶更好的胶吧？   听说过   4℃铺  37℃会凝固   是这种吗？

zpzp0312

& p7 s5 K- h1 T5 F7 T; t( W' x3 ~$ r6 K4 u& f+ N
其实你这种转移到饲养层上的细胞球也已经有分化倾向了/ y* S, E7 @2 F) E' U
另外，matrigel我们使用过，只能说效果不明显
& R0 w: V6 b7 Y: ~当时我们使用的是ESGRO feederfree medium- ~$ R% V( a& Z* M3 |* ]8 w5 r
效果和楼主的这两张图相似. W3 M* P9 x9 e  c7 o7 a
在matrigel上面也不能很好贴壁，有大量的细胞球似乎和基质有些黏连，但适当晃动就会飘起来
4 D; ~7 \. f! E, V. n* O/ [转移到饲养层，就可以发生贴壁，但是也有分化倾向
5 N: K; R5 o  p% X9 r但如果直接使用饲养层培养添加这个培养基，细胞生长状态还是不错的. L( i, b$ x5 B) ~; k. F" j
feederfree效果不满意

zmm

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3 h0 e$ t. ~3 y' m. V1 m
9 U9 Y5 e2 V, E: }5 v明胶等都可以

vegetax4132

回复 zmm 的帖子" y: m! D8 c8 R
. h; m6 I. m/ O) `# G4 _" U
我是铺了明胶的，
. V# ^+ P, M  H; h最近听说再铺一层血清就能贴壁了，试了下真的基本都贴了，不过这样克隆长的很慢了。好几天天都不见长大。。。

vegetax4132

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' w- ?. ~  W8 R+ D# ^4 ]
0 v- t2 L; y3 \# @: u  H谢谢，    不过ESGRO也是一种类似N2B27的培养基吗？      
" {, O( U1 X5 v$ g! O' D; a9 n2 G我用N2B27+LIF 加上feeder，  发现克隆形态不好，feeder有大量死亡   

zmm

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. x. u7 [7 v- p% }  b. e* C3 [2 ]/ Z血清也可以。因为不含血清，所以克隆增殖较慢